抗VGLUT1，豚鼠

Anti VGLUT1, Guinea Pig

VGLUT（Vesicular Glutamate Transporter）是將哺乳類興奮性突觸傳遞中主要的神經(jīng)遞質(zhì)谷-氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)至突觸囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，研究認(rèn)為它轉(zhuǎn)運(yùn)谷-氨酸時(shí)利用了質(zhì)子電化學(xué)梯度。目前已在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)VGLUT1、VGLUT2 和 VGLUT3三種亞型，它們的表達(dá)部位各不相同， VGLUT1主要在大腦皮層和海馬體表達(dá)，VGLUT2在丘腦、下丘腦和杏仁核等部位表達(dá)。而表達(dá)VGLUT3的神經(jīng)元很少，有報(bào)告稱，根據(jù)mRNA表達(dá)模式推斷，VGLUT3分布于紋狀體、海馬體、大腦皮層、中縫核等部位^1）。在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域中，抗VGLUT抗體也被用作谷-氨酸能神經(jīng)元的標(biāo)記抗體。

“抗VGLUT1，豚鼠”是豚鼠來源的抗VGLUT1多克隆抗體，可用于免疫組化染色的多重染色。

◆抗體信息

◆Protocol（示例）

 1. 灌注固定：使用0.1%檸檬酸鈉/PBS灌注除血后，4% PFA灌注

 2. 后固定： 4% PFA （4 h）

 3. 蔗糖替換：30%蔗糖/PBS（4℃，過夜~約2天）

 4. 制備冰凍切片：去除蔗糖后，制備冰凍包埋塊，并用低溫切片機(jī)制備30 μm厚的切片

 5. 甘-氨酸處理：25 mM甘-氨酸PBS（20 min左右）

 6. 封閉：5% 正常山羊血清，0.3% Triton X-100/PBS（4℃，過夜）

 7. 一抗：抗VGLUT1, 豚鼠（1︰1,600），1% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100/PBS（4℃，過夜~2 天）

 8. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)

 9. 二抗：Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:1,600) （產(chǎn)品編號(hào)： 568-77901)，

              1% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100/PBS (室溫，2 h)

10. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)

11. 封裝： 4℃下避光存儲(chǔ)

◆數(shù)據(jù)

應(yīng)用數(shù)據(jù)

▼ 免疫組化染色

物種：小鼠；部位：海馬體；樣品：冰凍切片；抗體濃度：1:1,600

<數(shù)據(jù)提供> 京都工藝?yán)w維大學(xué) 應(yīng)用生物學(xué)系 宮田老師  

神經(jīng)細(xì)胞的染色使用NeuroTrace™ 435/455 Blue Fluorescent Nissl Stain（ThermoFisher Scientific, Inc.）                    

◆Q＆A

關(guān)于Protocol

Q：使用哪種二抗比較好？

A：FUJIFILM Wako擁有以下二抗的實(shí)績：

Alexa Fluor^® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（Jackson ImmunoResearch公司，產(chǎn)品編號(hào)：568-77901)

關(guān)于應(yīng)用

Q：可以用于什么動(dòng)物？

A：已確認(rèn)可用于小鼠和大鼠，暫未確認(rèn)是否可用于其他動(dòng)物。

◆參考文獻(xiàn)

1.Gras, C. et al.: J. Neurosci., 22(13), 5442(2002).

A third vesicular glutamate  transporter expressed by cholinergic and serotoninergic neurons

◆產(chǎn)品列表