貨號： HG-NA100

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于核酸的提取、富集、純化等步驟，其處理后的產(chǎn)物可用于臨床體外檢測使用。

本試劑盒使用超順磁性微球可以特異性的吸附 DNA，通過洗滌去除 DNA 以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，分離純化得到高質(zhì)量核酸。

規(guī)格：

100 人份

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品儲存條件與有限期：

2-8℃下有效期為 24 個月。

適用儀器：

本試劑盒適用于 BIO-DL32, TIANGEN TGuide S32, TIAN LONG NP968 -C 等自動化核酸提取儀，也適用于手動提取。

樣本要求：

新鮮或冷凍的抗凝處理的人全血樣品、組織及細胞。

使用方法：

首i次使用前： 

（1）在洗滌液 I ③中緩慢加入指i定量（見瓶身標簽）的異丙醇（分析純，需客戶自備），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后2~8℃保存。 

（2）在蛋白酶 K 干粉 ⑤ 中加入指i定量（見管身標簽）的溶液 A ⑥，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后保存于 2~8℃，或分裝后保存于 -20℃。

一、手動操作流程

1. 客戶自備物品：

◆ 異丙醇（分析純） 

◆ 漩渦振蕩器 

◆ 80% 乙醇 

◆ 垂直混合儀 

◆ 1.5mL 離心管：2 個 / 樣品 

◆ 恒溫金屬浴 (Dry Bath Incubator, Cat.:2016C) 或水浴鍋 (55℃ ) 

◆ 單通道移液器：20μL、200μL、1000μL 

◆ 磁性分離器

2. 操作步驟

（1） 裂解 

取一個新的 1.5mL 離心管，加入 200μL 的抗凝血液樣品、組織或細胞（ 細胞取 1.0-1.5E6 cells 進行提取），具體可根據(jù)實驗調(diào)整（不足 200μL 時可用 PBS 或洗脫液④補足），再分別加入 10μL 的蛋白酶 K ⑤（檢查是否已加入溶液 A ⑥）和230μL 的裂解液②，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩 10s 后，置于 55℃條件下反應(yīng) 5min。

（2） 結(jié)合 

加入 320μL 的異丙醇和 20μL 的磁珠懸液①，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩 10min（或漩渦震蕩 10s 后置于垂直混合儀上反應(yīng) 10min）。快速離心 3s 后，然后將離心管置于磁性分離器上放置 2min，用移液器移去上清液并取下離心管。注意：此步驟的磁性分離時間應(yīng)不少于 2 min。

（3） 洗滌 

①  加入 600μL 洗滌液 I ③（檢查是否已加入異丙醇），以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少 1min，使磁珠充分重懸，快速離心 3s 后，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。重復(fù)該步驟一次。 

②  加入 600μL80% 乙醇，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩至少 1min，使磁珠充分重懸，快速離心 3s 后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。重復(fù)該步驟一次。 

注意：最后一步洗滌應(yīng)盡量除盡洗滌液。

（4） 干燥

保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置 10min 后，即磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。 

注：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時，可用小量程移液器吸棄液體。

（5） 洗脫

加入 100~200μL 洗脫液④，渦旋震蕩，或用移液器緩慢吹打磁珠，使磁珠充分重懸。然后于 55℃條件下加熱 5min，快速離心 3s 后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的 1.5mL 離心管中，此即為純化得到的基因組DNA，可保存于 -20℃。

二、自動化操作流程

1. 客戶自備物品：

◆ 磁棒式自動化核酸提取儀（BIO-DL 32， TIANGEN TGuide S32， TIANLONG NP968 -C 等） 

◆ 異丙醇（分析純） 

◆ 80% 乙醇 

◆ 96 孔磁棒套 2 個 

◆ 1.5 mL 離心管：2 個 / 樣品 

◆ 96 孔深孔板 1 個 

◆ 單通道移液器：20μL、200μL、1000μL

2. 操作步驟

（1）在 96 孔深孔板第 1 列和第 7 列依次加入 10μL 蛋白酶 K（檢查 是否已經(jīng)加入溶液 A），200μL 樣本，230μL 裂解液和 320μL 異丙醇 。 

（2）在第 2 列和第 8 列加入 600μL 洗滌液 I（檢查是否已加入異丙醇）和 20μL 磁珠懸液。 

（3）在第 3 列和第 9 列加入 600μL 洗滌液 I（檢查是否已加入異丙醇）。 

（4）在第 4 列和第 10 列加入 600μL80% 乙醇。 

（5）在第 5 列和第 11 列加入 600μL80% 乙醇。 

（6）在第 6 列和第 12 列加入 100~200μL 洗脫液。

注意：第 1 列和第 7 列試劑加入時按照以下順序加入，先加入 10μL 蛋白酶 K，再加入 200μL 樣本，然后加入 230μL 裂解液，最后加入 320μL 異丙醇。（若試劑加入順序不對，可能導(dǎo)致核酸提取濃度及純度偏低。）

（7）自動化核酸提取儀提取參數(shù)設(shè)置建議：

注意事項：

1. 操作之前，請務(wù)必認真閱讀本產(chǎn)品手冊。

2. 血液樣品的質(zhì)量對產(chǎn)物 DNA 的純化量有較大影響，應(yīng)避免反復(fù)凍融血液樣品。 

3. 蛋白酶 K 干粉溶解后，可分裝儲存于 -20℃，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

4. 應(yīng)避免對磁珠進行冷凍、離心等操作。 

5. 磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。 

6. 磁珠干燥前，應(yīng)使用移液器吸盡洗滌液。 

7. 應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會嚴重降低核酸洗脫效率。 

8. 建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。 

9. 在 96 孔板中進行磁性分離操作時，磁珠吸附時間可適當延長。

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