BG6005 谷an酰胺酶活性測(cè)定試劑盒 氮代謝
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BG6005
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/3/31 17:37:58
- 訪問(wèn)次數(shù) 35
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BG6005 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝 |
谷an酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
谷an酰胺酶活性測(cè)定試劑盒 氮代謝
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
GLS（EC 3.5.1.1）是酰胺基水解酶，催化天dong酰胺水解成谷an酸氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
測(cè)定原理：
GLS 催化谷an酰胺水解成 L-谷an酸氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BG6005-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 60 ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 20 ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 30 ml | 常溫 |
試劑四：液體 | 10 ml | 常溫 |
試劑五：液體 | 6 ml | 常溫 |
試劑六：液體 | 6 ml | 常溫避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、1ml 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；
8000g4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，加入 1ml 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣品測(cè)定（在 EP 中加入下列試劑）：
試劑名稱（μl） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑一 | 100 | 100 |
試劑二 | 400 | 400 |
混勻，37℃水浴 1 小時(shí)
試劑三 | 525 | 525 |
混勻，8000 g，25℃離心 10 min；取上清液，在EP 管中加入下列試劑
上清液 | 650 | 650 |
試劑四 | 150 | 150 |
試劑五 | 100 | 100 |
試劑六 | 100 | 100 |
混勻，室溫靜置 15min，420nm 處讀取吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。
注意：
1、試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。
2、ΔA（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）若出現(xiàn)負(fù)值，可能是酶活性較低，可將反應(yīng)時(shí)間 1h 延長(zhǎng)到 2h，相應(yīng)的在計(jì)算公式中除以 2。
酶活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y =3.8488x +0.0057，R2 = 0.9983；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值A(chǔ)。
1、血清（漿）GLS 活性
單位定義：每ml 血清（漿）每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。GLS（nmol /min/ml）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷V 樣÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞 GLS 活性
按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每mg 蛋白質(zhì)每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
GLS（nmol /min /mg prot）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr
按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每g 組織每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。
GLS（nmol/min/g 鮮重）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000
=181.8×(ΔA -0.0057)÷W
按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。GLS
（nmol/min/104 cell）＝(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總÷(500× V 樣÷V 樣總)÷T×1000
=0.3637×(ΔA-0.0057)
V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，60min；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.05ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)， 500 萬(wàn); 1000，μmol 到nmol 換算系數(shù)。
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