凝固血液基因組DNA提取試劑he（溶液型）

凝固全血基因組DNA提取系統(溶液型）

目錄號:40311

產品內容：

自備試劑：

異丙醇、70％乙醇

保存條件：

室溫（15~25℃）

產品簡介：

適用于從凝固血液樣本中快速提取高質量的基因組DNA。

首先細胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固xue塊釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA在Sigma的分子生物學級Glycogen的助沉下通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

產品特點：

1. 簡便快速：30min內可獲得高純度的基因組DNA。

2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提。

3. 高產：典型的產量1ml全血可提取出10～30µg基因組DNA。

4. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達 50～150 kb，可直接進行可直接用于構建文庫、PCR、、酶切、Southern-blot等分子生物學實驗。

注意事項：

1. 本試劑盒可運用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細胞沉淀團很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標本。

2. 為了優良效果，zui hao使用新鮮血液標本或者4℃存放少于3天的標本，不要使用反復凍融超過3次的標本，否則會嚴重降低產量。

3. 不同樣品尤其疾病樣品中白細胞數量差異可能非常大，血液DNA產量的個體差異也可能非常大。

4. 如果結合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

5. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請聯系我們索取其它處理量的操作手冊。

6. DNA溶解液是TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），長期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。也可以使用水洗脫，但應該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

操作步驟：

1. 加入■50μl凝固血液至一個1.5ml離心管或◆1ml凝固血液至一個50ml離心管，劇烈渦旋或者用手劇烈拍打離心管幫助打散凝xue塊。

2. 加入■550μl或◆11ml細胞核裂解液，吹打混勻，再加入■3μl或◆60μl蛋白酶 K(20mg/ml)，顛倒混勻25次。

3. 55℃放置3小時至過夜，直到所有的凝塊wan全融解。

4. 可選步驟（一般不需要做）：加入■3μl或◆60μl RNase A（4mg/ml），在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA。

5. 將裂解物迅速冷卻到室溫（可置冰上一分鐘）。

6. 加入■200μl或◆4ml蛋白沉淀液，在渦旋振蕩器上高速連續振蕩混勻25 秒，混勻后可能見到一些小的蛋白團塊。

注意：液體確實要旋轉著振蕩起來，而不僅僅是上下振動，這樣混勻效果和沉淀蛋白效果zui jia。

7. 置冰上■5 分鐘 或◆10 分鐘。

8. ■13,000-16,000xg離心5分鐘或◆2,500xg(可根據需要調整加大離心力)離心10分鐘。這時候應該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

9. 小心吸取上清到一個新的■1.5ml離心管或◆50ml離心管中。

注意：吸取上清時，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。

10. 加入■600μl的室溫異丙醇和1μl Glycogen溶液或◆12ml 室溫異丙醇和 20μl Glycogen溶液，輕柔顛倒50次混勻或者直到出現棉絮狀（絲狀）白色 DNA沉淀。（注意：處理樣品量大的時候才可能看見絲狀沉淀，處理樣品量少或者保存質量不好的時候往往看不見。）

11. ■13,000-16,000xg離心1分鐘或◆2,500 x g 離心 3 分鐘，這時候應該看到管底白色的 DNA 沉淀。

12. 小心棄上清，倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇（注意不要丟失沉淀）。

13. 加入■600μl或◆12ml 70%乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀。

14. ■13,000-16,000xg離心1分鐘或◆2,500xg離心1分鐘, 倒去上清

（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。

注意：不要干燥過頭，否則 DNA 極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應。

15. 加入■20μl 或◆250-400μl TE緩沖液(或者客戶根據需要選擇的緩沖液)重新水化溶解DNA 沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在 65℃溫育 30-60分鐘（不要超過一小時），也可以在室溫或者 4℃放置過夜來重新水化 DNA，中間不時的輕彈管壁幫助重新水化 DNA。

16. DNA可以存放在 2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

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