Universal DNA Purification Kit

通用型 DNA 純化回收試劑盒

通用型DNA純化回收試劑盒   核酸提取

目錄號:43013

產品內容：

自備試劑：

無水乙醇

保存條件：

室溫（15 ~ 25℃）

產品簡介：

本試劑盒既能從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化 PCR 產物，還適用于酶切產物 DNA 片段的純化回收、探針標記后的純化回收、DNA 樣本濃縮。使用本產品可回收 100bp-10kb 大小的DNA 片段，回收率可達 85%-95%。該試劑盒操作簡便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序等實驗。

注意事項：

1. Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性，消除高溫潮濕或其他不良環境因素對吸附柱造成的影響。收到貨后 2 個月內，不用做柱平衡。

2. 使用前請先檢查Buffer BL、Buffer DB 是否出現渾濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

3. 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷。

4. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。

操作步驟：

第一次使用前，請先在 Buffer WB 中加入無水乙醇，并打對勾標記，加入體積請參照瓶上的標簽。

一、從瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

2. 切膠：在長波紫外燈下，用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠。

3. 稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠，放入 1.5 ml 離心管中，稱取凝膠重量（去除空管重量）。如果凝膠重量為 100mg，其體積可視為 100ul。

4. 溶膠：加入 3 倍體積 Buffer DB，56℃水浴，直到凝膠wan全溶解，期間顛倒混勻 2 次加速溶膠。

（如果凝膠濃度大于 2%，應加入 6 倍體積 Buffer DB。對于回收<100 bp 的小片段，可在凝膠wan全溶解后，再加入 1.5 倍膠塊體積的異丙醇以提高回收率。）

5. 吸附：待溶液冷卻至室溫后加入吸附柱中，室溫靜置 1 min，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（如果總體積超過 750 ul，可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中）

6. 漂洗：加入 600 ul 漂洗液Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

7. 二次漂洗：重復操作步驟 6。

8. 干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙醇，防止其抑制下游反應。

9. 回收：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 65℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

二、 從 PCR 反應液或酶切反應液中回收 DNA 片段

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul 平衡液Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

2. 加結合液：估計PCR 反應液或酶切反應液的體積，向其中加入 5 倍體積溶液 Buffer DB，充分混勻。

（如果樣本體積小于 100ul,用滅菌水補齊 100ul,以提高回收效率。）

3. 吸附：將上一步所得溶液加入一套吸附柱中，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（ 注意：吸附柱容積為 750ul，若樣品體積大于 750ul 可分批加入）

4. 漂洗：加入 600ul Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

5. 二次漂洗：重復操作步驟 4。

6. 干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙醇，防止其抑制下游反應。

7. 洗脫：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

通用型DNA純化回收試劑盒   核酸提取