產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品為在 PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上檢測(cè)糖蛋白的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一站式，用戶(hù)不要單獨(dú)配制所需成分，簡(jiǎn)單快捷。

2.提供一種陽(yáng)性對(duì)照蛋白及一種陰性對(duì)照蛋白，便于分析問(wèn)題。

3.專(zhuān)一性強(qiáng)，通過(guò)共價(jià)修飾方式檢測(cè)糖基，不檢測(cè)蛋白部分。

4.快捷，只需不到 2 小時(shí)，而其他的染色方法需要 4-5 小時(shí)。

5.染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無(wú)色

6.靈敏度高，理論上可以達(dá)到微克級(jí)別，但實(shí)際應(yīng)用時(shí)靈敏度跟靶蛋白的糖基化程度相關(guān)。

7.可以用于 SDS-PAGE 和 2D 電泳的凝膠檢測(cè)，也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測(cè)

（但背景較高），還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測(cè)。

8.本產(chǎn)品足夠染色 10 張mini-PAGE 膠或 20 張 8×8 cm 的蛋白印跡纖維素膜。

9.糖蛋白染色試劑盒(PAGE 膠專(zhuān)用)只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

氧化試劑2.5 g2 mL 棕色管

還原試劑1.25 g2 mL 本蓋管

糖蛋白染色試劑250 mL250 mL 本色瓶

陽(yáng)性對(duì)照（卵白蛋白）CAS：

9006-59-11 mg0.5 mL 黃蓋管

陰性對(duì)照（大豆胰-蛋白酶抑制劑）1 mg0.5 mL 橙蓋管

250 mL 本色塑料瓶（空）無(wú)2 個(gè)無(wú)

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照干粉需要 4℃或更低溫度長(zhǎng)期保存，有效期一年。

注：糖蛋白染色試劑的有效期只有半年（從出廠時(shí)間開(kāi)始計(jì)算）。

自備試劑

甲醇、冰醋酸、超純水、1×SDS-PAGE 上樣緩沖液等。

使用方法：

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.配制 3%醋酸溶液：將 30 mL 自備的冰醋酸與 970 mL 超純水混勻，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

2.配制 50%甲醇溶液：將 250 mL 自備的甲醇與 250 mL 超純水混勻，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

3.配制氧化試劑溶液：將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的 250 mL

空本色塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液（第 1 步配制），充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

4.配制還原試劑溶液：將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的 250 mL 空本色塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超純水，充分混勻溶解后得到還原試劑溶液， 室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

5.配制陽(yáng)性對(duì)照（卵白蛋白）溶液：向裝有 1 mg 卵白蛋白固體的管中加入 1 mL 1× SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得卵白蛋白溶液的濃度為 1mg/mL，然后分裝成 100 μL/管共 10 管，留下一管當(dāng)天使用，其余的放-20℃長(zhǎng)期保存。對(duì)于 80 mm

×80 mm 的凝膠來(lái)說(shuō)，每條泳道加 10 μL 的陽(yáng)性對(duì)照溶液即可。

6.配制陰性對(duì)照（大豆胰-蛋白酶抑制劑）溶液：向裝有 1 mg 大豆胰-蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得大豆胰-蛋白酶抑制劑溶液的濃度為 1 mg/mL，然后分裝成 100 μL/管共 10 管，留下一管當(dāng)天使用，其余的放- 20℃長(zhǎng)期保存。對(duì)于 80 mm×80 mm 的凝膠來(lái)說(shuō)，每個(gè)泳道加 10 μL 的陰性對(duì)照溶液即可。

7.樣品稀釋?zhuān)河?SDS-PAGE 上樣緩沖液將蛋白樣品濃度稀釋為 1 mg/mL，SDS-PAGE上樣緩沖液終濃度為 1×。對(duì)于 80 mm×80 mm 的凝膠來(lái)說(shuō)，每個(gè)泳道加 10 μL的樣品。

凝膠染色的操作步驟（注意:請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作）

8.取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，加入到裝有 100 mL 50%甲醇溶液的器皿中，完-全浸泡 30 分鐘后，倒出甲醇溶液。

9.用 100 mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

10.將 PAGE 膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25 mL 氧化試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。

11.用 100 mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

12.將膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25 mL 糖蛋白染色試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。（注：若染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。）

13.將膠塊轉(zhuǎn)移到裝有 25 mL 還原試劑的器皿中，輕輕振蕩 5 分鐘。

14.用 3%醋酸溶液洗滌膠塊，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現(xiàn)為品紅條帶。膠塊保存在 3%醋酸溶液中。

硝化纖維素膜染色的操作步驟（注意:請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作）

15.用 20 mL 3%醋酸溶液洗滌膜兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

16.將膜轉(zhuǎn)移到 10 mL 的氧化試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。

17.用 10 mL 3%醋酸溶液洗滌膜 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

18.將膜轉(zhuǎn)移到 10 mL 的糖蛋白染色試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。注意：若染色試劑中有晶體析出，只需離心取上清液去除晶體即可，不要加熱來(lái)溶解晶體。

19.將膜轉(zhuǎn)移到 10 mL 還原試劑中，輕輕振蕩 5 分鐘。

20.用 3%醋酸溶液洗滌膜，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現(xiàn)為品紅條帶。膜可保存在 3%醋酸溶液中。

21.檢測(cè)后如果沒(méi)有條帶，可以用轉(zhuǎn)膜后的 PAGE 膠進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)樘堑鞍祝ㄓ绕涫歉叨?/p>

糖基化的蛋白）轉(zhuǎn)膜效果比較差。

選擇我們的糖蛋白染色試劑盒(PAGE 膠專(zhuān)用)，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！