上海喆圖科學(xué)儀器有限公司
在二氧化碳培養(yǎng)系統(tǒng)中進(jìn)行癌細(xì)胞體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)流程
檢測(cè)樣品:癌細(xì)胞
檢測(cè)項(xiàng)目:模擬生長(zhǎng)環(huán)境
方案概述:通過(guò)在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)癌細(xì)胞,研究人員能夠在體外模擬癌細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境,進(jìn)一步研究癌細(xì)胞的生物學(xué)特性,并為新型治療策略的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
二氧化碳培養(yǎng)箱在生物醫(yī)學(xué)研究,尤其是癌癥研究中扮演著關(guān)鍵角色。下面我們一起看下如何在二氧化碳培養(yǎng)箱中體外培養(yǎng)癌細(xì)胞,以利于對(duì)癌細(xì)胞生物學(xué)行為和治療反應(yīng)的研究。
實(shí)驗(yàn)所需材料與設(shè)備:
※二氧化碳培養(yǎng)箱:用于保持恒定的實(shí)驗(yàn)環(huán)境,包括溫度、濕度和CO2濃度。
※癌細(xì)胞株:挑選適宜的癌細(xì)胞株,例如人肺癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞等。
※培養(yǎng)基:依據(jù)細(xì)胞類型挑選相應(yīng)的培養(yǎng)基,通常包含必需的營(yíng)養(yǎng)成分、生長(zhǎng)因子和抗生素。
※實(shí)驗(yàn)試劑與耗材:包括胰蛋白酶、血清、培養(yǎng)容器、移液器等。
實(shí)驗(yàn)操作步驟:
步驟一:培養(yǎng)基的準(zhǔn)備
1.依據(jù)所選細(xì)胞株的要求配制相應(yīng)的培養(yǎng)基。
2.將配制好的培養(yǎng)基無(wú)菌條件下分裝至培養(yǎng)容器中,每個(gè)容器大約裝入20ml。
步驟二:細(xì)胞的接種
1.從液氮罐中取出凍存的癌細(xì)胞株,迅速在37°C水浴中解凍。
2.采用胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化,制備成單細(xì)胞懸液。
3.對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度至適當(dāng)?shù)乃剑ㄍǔ?x10^5個(gè)細(xì)胞/ml)。
4.將細(xì)胞懸液加入預(yù)先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中,每個(gè)容器中加入大約2ml。
步驟三:細(xì)胞的培養(yǎng)
1.將裝有細(xì)胞的培養(yǎng)容器放入二氧化碳培養(yǎng)箱,設(shè)定適當(dāng)?shù)臏囟龋ㄒ话銥?7°C)、CO2濃度(一般為5%)和濕度。
2.定期檢查細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,每隔2-3天更換新鮮培養(yǎng)基。
3.當(dāng)細(xì)胞覆蓋率達(dá)到約80%時(shí),進(jìn)行下一步的傳代培養(yǎng)。
步驟四:細(xì)胞的傳代
1.棄去原有的培養(yǎng)基,用PBS緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
2.加入適量胰蛋白酶消化細(xì)胞,輕輕搖晃容器,細(xì)胞脫落后,加入新鮮培養(yǎng)基以終止消化過(guò)程。
3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)容器中,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
總結(jié):
通過(guò)在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)癌細(xì)胞,研究人員能夠在體外模擬癌細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境,進(jìn)一步研究癌細(xì)胞的生物學(xué)特性,并為新型治療策略的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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