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還原型谷*甘肽（GSH）含量檢測試劑盒說明書
  微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1175
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 標準品：10mg還原型谷*甘肽（GSH）。臨用前加入1mL蒸餾水溶解，濃度為10mg/mL。2-8℃可以保存6周。

產(chǎn)品說明：
谷*甘肽是由谷*酸（Glu）、半*氨酸（Cys）和甘*酸（Gly）組成的天然三肽，是一種含巰基（-SH）的化合物，廣泛存在于動物組織、植物組織、微生物和酵母中。谷*甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（2-硝基 苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-*甲酸和谷*甘肽二硫化物（*）。2-硝基-5-*甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長412nm處具有最大光吸收。


技術(shù)指標：
低檢出限：3.763 μg/mL
線性范圍：12.5-400 μg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計或酶標儀、分析天平、勻漿器/研缽/細胞超聲破碎儀、低溫離心機、水浴鍋、移液器、微量玻璃比色皿或96孔板、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 若不確定樣本中GSH含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。

2. 因為試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。

3. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

實驗實例：

1. 取0.1002g大鼠肝臟加入1mL試劑一進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算?A=A測定-A空白=0.573-0.097=0.476，標準曲線y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=157.323，按樣本質(zhì)量計算得：

GSH含量（μg/g 質(zhì)量）=x÷W=1570.09 μg/g 質(zhì)量。

1. 取0.1014g韭菜葉片加入1mL試劑一進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算?A=A測定-A空白=0.117-0.097=0.020，標準曲線y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=10.226，按樣本質(zhì)量計算得：

GSH含量（μg/g 質(zhì)量）=x÷W=100.85 μg/g 質(zhì)量。

1. 取0.5mL雞血清加入0.5mL試劑一，取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算?A=A測定-A空白=0.127-0.097=0.03，標準曲線y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=13.452，按樣本體積計算得：

GSH含量（μg/mL）=2x=26.90 μg/mL。

參考文獻：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.

2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

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