目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2535-100T/96S山*醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC2535 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脫氫生成果糖,是調控生物體內 |
山*醇脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2535
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×5瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 粉劑×5支 | -20℃保存 |
| 試劑五 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：取3.4 mL試劑五加入1瓶試劑一粉劑中溶解，再加入一支試劑四，現用現配，24 h變質；
標準品：臨用前加入1.4 mL蒸餾水，即10 μmol/mL NADH標準品。-20℃保存4周，避免反復凍融。
產品說明：
SDH（EC 1.1.1.14）催化山*醇脫氫生成果糖，是調控生物體內山*醇含量的關健酶之一。SDH催化山*醇脫氫生成果糖，同時還原NAD+生成NADH，生成的NADH能將電子傳遞給NBT生成紫色的甲臜，根據這一原理可以計算SDH活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、超聲破碎儀，可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000×g 4℃離心10 min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1 g組織，加入1 mL提取液），進行冰浴勻漿。8000 ×g 4℃離心10 min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣本：直接檢測。
二、測定步驟
1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長至570 nm，可見分光光度計蒸餾水調零。
2、標準管的測定：將10 μmol/mL NADH標準品用水稀釋至1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 μmol/mL的標準溶液
(1) 標準品稀釋表
| 序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
| 1 | 10 | 30 | 170 | 1.5 |
| 2 | 10 | 100 | 900 | 1 |
| 3 | 1 | 180 | 20 | 0.9 |
| 4 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
| 5 | 1 | 140 | 60 | 0.7 |
| 6 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
| 7 | 1 | 100 | 100 | 0.5 |
| 8 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
| 9 | 1 | 60 | 140 | 0.3 |
實驗中每個標準管需20µL標準溶液。
（2）標準品測定表
| 試劑名稱(μL) | 標準管 | 空白管 |
| 標準溶液 | 20 | - |
| 蒸餾水 | - | 20 |
| 試劑二 | 30 | 30 |
| 試劑三 | 30 | 30 |
| 試劑一 | 120 | 120 |
| 混勻后室溫避光放置20 min，取200 μL于微量玻璃比色皿/96孔板中分別測定標準管和空白管在570 nm下的吸光度，記為A標準管、A空白管，計算ΔA標準=A標準管-A空白管。標準曲線只需做1-2次。 | ||
3、樣本的測定：
| 試劑名稱(μL) | 測定管 |
| 樣本 | 20 |
| 試劑二 | 30 |
| 試劑三 | 30 |
| 試劑一 | 120 |
將上述試劑按順序加微量玻璃比色皿/96孔板中，加試劑一的同時開始計時，記錄 10 秒時的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中準確反應3分鐘；迅速取出比色皿并擦干，570 nm下比色，記錄3分10秒時的吸光度A2，計算ΔA測定=A2-A1。（整個實驗過程要避光）
注意事項：
1.ΔA大于0.7時，建議將樣本用提取液稀釋后測量，計算公式中乘以稀釋倍數。
2.測定過程中樣本和工作液在冰上放置，以免變性和失活。
3.比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
參考文獻：
Aguayo M F, Ampuero D, Mandujano P, et al. Sorbitol dehydrogenase is a cytosolic protein required for sorbitol metabolism in Arabidopsis thaliana[J]. Plant science, 2013, 205: 63-75.
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