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堿性蛋白酶（AKP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2305
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入4mL蒸餾水，充分溶解；2-8℃保存8周。

2. 試劑二：臨用前取1瓶加入4mL提取液，沸水浴中攪拌溶解；2-8℃保存8周。

3. 標準品：20μmol/mL標準酪/酸。

產品說明：
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質肽鍵水解的酶類，屬于絲*酸蛋白酶。此外，該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵，具有轉酯及轉肽的功能。該酶是主要工業用酶之一，廣泛應用于制藥、絲綢、食品、制革等行業。
在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪/酸；在堿性條件下，酪/酸還原磷鉬酸生成鎢藍；鎢藍在680nm有特征吸收峰，測定680nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測。或直接稱取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min 以上，調節波長至680nm，蒸餾水調零。

2. 試劑一、試劑二和試劑三置于40℃水浴保溫30min以上。

3. 標準溶液的配制：臨用前將20μmol/mL標準液用蒸餾水稀釋80倍至0.25μmol/mL 標準溶液使用，現用現配。

1. 樣本測定：(1.5mLEP管中分別加入下列試劑)

取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，分別記為A對照管、A測定管、A空白管、A標準管。
并計算ΔA測定=A測定管-A對照管、ΔA標準=A標準管-A空白管?？瞻坠芎蜆藴使苤恍枳?-2次

注意事項：
若反應較弱，（A測定管-A對照管）差值較小，可適當延長反應時間（20-30min），即第一步水浴時間，最后計算酶活時對公式進行修改。
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