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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒
測定試劑盒說明書
研究意義:
GSH/GSSG 是細胞內重要的氧化還原對之一。因此,測定細胞內 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態,也是谷胱甘肽氧化還原循環的主要指標之一。此外,總谷胱甘肽(total glutathione, tGSH)含量還能夠反映細胞 γ-谷氨酰循環狀態。通過該試劑盒,可以獲得四個指標,即 GSH 含量、GSSG 含量、總谷胱甘肽含量和 GSH/GSSG 比值。
測定原理:
利用循環法測組織中總谷胱甘肽含量,2-VP 法測 GSSG 含量。總谷胱甘肽含量=GSH+2GSSG,該指標與谷胱甘肽氧化還原循環無關,只與 γ-谷氨酰循環狀態,即 GSH 合
成和降解有關。
實驗中所需儀器及設備:
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1ml 比色皿、雙蒸水
試劑組成和配置:
試劑一×1 支;加雙蒸水 100ml,充分溶解,4℃保存,用于試劑二和試劑三溶解;
試劑二×1 支;加試劑一 11ml 充分溶解,4℃保存;
試劑三×1 支;臨用前,加試劑一 11ml 充分溶解;
試劑四×1 支,稀釋液四×1 支,臨用前,加 1ml 稀釋液四稀釋試劑四;
液體五×1 支;
試劑六×1 支,充分溶解于 50ml 雙蒸水;
GSH 標準品×1 支;臨用前,加雙蒸水定容 100ml,然后稀釋 10 倍,則為 10μmol/L;
GSSG 標準品×1 支;臨用前,加雙蒸水定容 100ml,然后稀釋 10 倍,則為 10μmol/L。
樣品前處理:
稱取約 0.1g 樣品,加 1ml 試劑六,冰上充分研磨, 8000rpm 4℃離心 10min,取上清。 (如上清不清澈,再離心 3min)
總谷胱甘肽含量測定:
1、將試劑一于 25℃預熱 30min
2、按下表操作
標準管 | 測定管 | |
試劑二 | 0.1ml | 0.1ml |
試劑三 | 0.1ml | 0.1ml |
標準品 | 0.1ml | / |
樣品 | / | 0.1ml |
試劑一 | 0.7ml | 0.7ml |
試劑四 | 0.1ml | 0.1ml |
加試劑四后,迅速混勻,于 412nm處測定吸光值,記錄 30s 和 150s 的數據,分別記為 A1、A2、A3 和 A4。
GSSG 含量測定:
1、將試劑一于 25℃預熱 30min
2、按下表操作
標準管 | 測定管 | |
標準品 | 0.1ml | / |
樣品 | / | 0.1ml |
試劑五 | 2μL | 2μL |
加試劑五后混勻, 于37℃水浴30min后, 取0.1ml溶液進行下一步測定, 即下表中樣品0.1mL。
標準管 | 測定管 | |
試劑二 | 0.1ml | 0.1ml |
試劑三 | 0.1ml | 0.1ml |
標準品 | 0.1ml | / |
樣品 | / | 0.1ml |
試劑一 | 0.7ml | 0.7ml |
試劑四 | 0.01ml | 0.01ml |
加試劑四后,迅速混勻,于 412nm 處測定吸光值,記錄 30s 和 150s 的數據,分別記為 B1、
B2、B3 和 B4。
tGSH 含量計算
tGSH(μmol/g)=(A4-A3)÷(A2-A1)×標準濃度(10μmol/L)×樣品測定前稀釋倍數
÷樣品質量(g) ,
GSSG(μmol/g)=(B4-B3)÷(B2-B1)×標準濃度(10μmol/L)×樣品測定前稀釋倍數
÷樣品質量(g) ,
GSH(μmol/g)=tGSH-2×GSSG。
注意事項:
1、測定前請先用 1~2 個樣本做預實驗,如吸光值很高,則需用試劑六稀釋到適當倍數,使得測定過程吸光值呈線性變化
2、配制試劑以及樣品處理都需在低溫下,可置于冰上
3、因為提取過程中去掉蛋白質,所以提取液不能用于測定蛋白含量。如需測樣品的蛋白含
量,請事先將樣品分成兩份
4、測定時也可將標準品配制成不同濃度后,制作成標準曲線,然后將測定樣品代入標準曲
線計算,標準品配制的濃度一般不超過 20μmol/L
氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發貨。
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3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
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5、請辦理完貨款后,將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品:常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。