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徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術的特點

時間:2013/5/14閱讀:3654
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 徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術的特點

 
熒光顯微術是普通顯微術的重大發展。它具有*的*性。熒光顯微術是在黑暗的背景下觀察標本的彩色圖像,有良好的反襯,故觀察清楚、方便,易于鑒別,眼睛也不易疲勞。由于熒光染色素的濃度極稀(儀1:100000)便能發出明亮的熒光,因此一般油機體眾說是無毒的,為活體觀察,如研究功能器官的過程和細微結構,某些代謝過程的變化等,提供了廣泛的可能性。另外,熒光色素染色法比較簡單,時間短,標本制作容易,特別適于快速工作,如傳染病的快速診斷等。
 
(1)熒光顯微術方法的選擇徠卡熒光顯微鏡可用明場或暗場方法,—般用暗場效果較好,因為它產生的現場背景是黑的,圖象反襯強,不過沒有明場方便。至于透射熒光還是反射熒光,一般來說,反射熒光應用范圍廣一些,它不僅適用觀察普通標本片,而且還能現察不適明標本。
 
根據激發光波長的特點,熒光顯微術可用紫外光或紫藍光激發。紫外光的特點在可觀察機體組織的自體熒光(如核酸及金剛石等)在組織學工作中便于區別背景熒光和染色目標的熒光。但缺點是:常常會引起標本熒光的光致淬滅,標本難以重復觀察,并且使顯微攝影發生團難。另外對活體標本有叨顯的殺傷作用,對長期從事這項工作人員的暇睛也有傷害。特別是對絕大多數的熒光色素來說,紫外區不是zui大的光譜吸收風因而不能得到先分的激發。而紫藍光卻沒有以上—些缺點,但不足的是不能激發組織的自體熒光,因此不適于研究組織的白體熒光結構。對于個別熒光色素,知羅達明R200,可用波長更長的藍綠光作為激發光為佳。
 
(2)結果記錄方法徠卡熒光顯微術所觀察的熒光圖象,主要以兩個指標判斷結果,一是形態學特征,二是熒光的亮度。在免疫熒光工作中,尤其是這樣,必須將兩者結合起來綜合判斷,不可偏廢。結果記錄是根據主觀指標或客觀指標,但一般常是憑工作者目力觀察的主觀指標由于這是定性的觀察,所以記錄的度較差。
 
隨著科學技術的發展,采用客觀指標記錄結果已開始應用。
 
①用不同厚度的中性濾片插入激發濾片和標本之間的光路中,以看熒光減弱的極度;
 
②不同標本以相同的曝光時間進行顯微攝影,然后用光密度計測定膠卷圖象;
 
③直接用熒光計測熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標本;
 
④用光敏電池曝光表測定圖象的亮度,或者與掃描裝置結合,對視場的特定部位進行掃描等,如熒光顯微光度計。
 
備注:徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術的部分文章由北京中儀光科科技發展有限公司編輯整理上傳。
 

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