植物類黃酮含量檢測試劑盒說明書

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植物類黃酮含量檢測試劑盒說明書

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格：100T/48S

類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸餾水。

一、測定操作表

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 470nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

	對照管	測定管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
樣本待測液（µL）	60	60
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）			60
蒸餾水（μL）				60
試劑一（µL）	15	15	15	15
混勻，室溫靜置 5min
試劑二（µL）		15	15	15
混勻，室溫靜置 5min
試劑三（µL）	120	120	120	120
60%乙醇（µL）	105	90	90	90
混勻，37℃水浴 45 min，10000g，10min 離心取上清，取 200µL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中測定 A470。計算ΔA=A 測定-A 對照，ΔAˊ=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以單寧酸濃度為橫坐標(biāo)，ΔAˊ為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b，將ΔA 帶入方程求得 x； 2、按樣本鮮重計算

類黃酮含量（mg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W 3、按樣本蛋白濃度計算

類黃酮含量（mg/ mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr

V 提取：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

1、 OD 值大于 0.4，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、顯色完成后立即測定，2 小時后吸光值會下降。

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