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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔肝內膽管上皮細胞 | 商品貨號 | A01X2059 |
組織來源 | 肝臟 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 上皮樣，多角形細胞 |
包被條件：
培養基：原代上皮細胞培養體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
膽管，輸送膽汁的管道。由肝分泌的膽汁，經肝左、右管、肝總管、膽囊管進入膽囊貯存，肝內膽管的部分包括：左、右肝管；左內葉、左外葉、右前葉、右后葉膽管；各肝段膽管；小葉間膽管；毛細膽管。 常見的膽管病變如膽道閉塞、原發性硬化性膽管炎、膽管癌等，都是以膽管上皮為病變靶位，因此研究膽管上皮細胞的生物學特性和病理變化有重要意義。在這些病變過程中，肝內膽管上皮常暴露于常暴露于較高炎癥因子中，會表現細胞損傷和繼發性增值為特征的病理變化。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈上皮樣，多角形細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH2
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1
人肺巨細胞癌高轉移細胞株；PG-BE1
人晶體上皮細胞永生系；SRA01/04（HLE）
人結直腸腺癌細胞；SW620[SW620；SW-620]
人腦星形膠質母細胞瘤；U-87MG[U87MG；U87MG]
人葡萄膜黑色素細胞；UM
人胚肺成纖維細胞；WI-38[WI38]
人肺癌細胞；A-427[A427]
倉鼠/小鼠雜交瘤細胞；145-2C11
小鼠黑色素瘤細胞；B16
人胰腺癌細胞；AsPC-1
SV40T轉化的人胚腎細胞（亞系）；293T/17
人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞；C918
色克羅彭斯特德菌Kroppenstedtia eburnea
硝酸鹽陰性不動桿菌Acinetobacter anitratum
小白鏈霉菌Streptomyces albulus
小孢根霉華變種Rhizopus microsporus var. chinensis
小孢根霉須狀變種Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis
小腸腸球菌Enterococcus hirae
小腸結腸炎耶爾森氏菌Yersinia enterocolitica
小腸結腸炎耶爾森氏菌小腸結腸炎亞種Yersinia enterocolitica subsp. enterocolitica
小單孢菌Micromonospora sp.
小克銀漢霉Cunninghamella echinulata
兔肝內膽管上皮細胞小麥赤霉Gibberella saubinetii
小麥赤霉菌Gibberella zeae
小牛肉葡萄球菌Staphylococcus vitulinus
小韋榮球菌Veillonella parvula (Veillon and Zuber) Mays et al.
楔孢犁頭霉Absidia cuneospora
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