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真菌/酵母氧化酶活性測定試劑盒產品說明書
閱讀：1180 發布時間：2022-7-13| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 176.8KB |
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HL10014.5 v.A 真菌/酵母氧化酶活性測定試劑盒產品說明書
主要用途 真菌/酵母氧化酶活性測定試劑是一種旨在通過氧化酶反應系統中還原性氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法測定樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種真菌或酵母株裂解懸液中氧化酶的活性檢測。產品嚴格無 菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景 氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的線粒體上（包括真菌和酵母細胞），主要 通過氧化磷酸化為細胞提供能量。基于底物還原型（reduced cytochrome c），受到氧 化酶的催化，轉化為氧化型（oxidized cytochrome c），在分光光度儀下，出現吸光值的變化（550nm 波長），由此定量測定氧化酶的活性。氧化酶反應系統為：
Cytochrome c oxidase 4 cytochrome c2＋ + 8H+ + O2 → 4 cytochrome c3+ + 2H2O + 4H+ 還原型 氧化型 （高吸收峰） （低吸收峰）
注意事項 1． 本產品為 20 次操作，包括背景對照 2． 操作時，須戴手套 3． 樣品中忌用 DTT 和巰基乙醇等處理 4． 強化液（Reagent B）為固體狀，移取方法為：使用 1 毫升槍頭，將部分剪去；或使用 0.5 毫升 PCR 管的蓋子內圈盛滿；或秤重 0.1 克 5． 建議測定細胞裂解懸液的蛋白濃度，便于計算活性單位之需；建議使用 Bradford 蛋白質濃度定量檢測 試劑盒（30030.1） 6． 每增加 1 個樣品，增加反應工作液為：反應液（Reagent E）100 微升＋穩定工作液 3 微升，以此類推。 配制反應工作液時，須根據樣本數量配制實際工作液容量 7． 系統操作過程中，背景測定只需 1 次 8． 分光光度計波長嚴格設置在 550nm，誤差 10nm 將不產生信號 9． 加樣后 3 秒內進行比色測定 10．比色測定后，比色皿須清洗* 11．比色皿背景空對照 0 秒讀數通常大于 0.2 為理想狀態；建議使用比色皿測定 12．背景空對照的正常讀數差值（0 秒－60 秒）通常為 0.001 至 0.005（正負即可） 13．樣品 0 秒讀數通常和背景空對照 0 秒讀數一致 14．樣本測定 60 秒讀數低于 0 秒讀數表明具有酶活性15．酶活性單位濃度定義：在 28℃室溫下，pH 7.0 的情況下，每單位酶在單位時間內（每分鐘）氧化 1 微 摩爾的16．建議待測樣本總蛋白濃度為 50 微克/100 微升；如果樣本酶活性過低或過高，即 60 秒讀數不變或為零， 則可以增加或降低樣本量（本公司提供 Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒 30030.1） 17．本公司提供系列細胞色素相關試劑產品 質量標準 1． 本產品經鑒定性能穩定 2． 本產品經鑒定檢測敏感
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