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線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
分光光度法
貨號: BC0510
規格：25 管/24 樣
產品內容：
試劑一：25mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：5mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：25mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑五：1mL×1 支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 2mL 蒸餾水，現配現用；
工作液的配制：臨用前將試劑五轉移到試劑四中混合溶解，現配現用。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒產品簡介： 復合體Ⅰ（EC 1.6.5.3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、 微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從 NADH 傳 遞給 CoQ，同時可使 O2還原生成 O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產生 O2.-的主要部位。測定該酶活性， 不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態。 復合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+，在 340nm 下測定 NADH 的氧化速率計算出該酶活 性的大小。 試驗中所需的儀器和試劑： 紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒操作步驟：
一、樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離： (1) 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研 缽勻漿。 (2) 將勻漿 600g， 4℃離心 5min。 (3) 棄沉淀，將上清液轉移另一離心管中，11000g4℃離心 10min。 (4) 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄露的復合體Ⅰ（此步可選做）。 (5) 步驟（4）中的沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超生波破碎（冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間歇 10 秒，重復 30 次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。
二、測定步驟： 1. 分光光度計或酶標儀預熱30min 以上，調節波長340nm，蒸餾水調零。 2. 樣本測定 (1) 工作液于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）孵育 5min。 (2) 在 1ml 石英比色皿中加入 40uL 樣本、800uL 工作液和 60uL 試劑六，混勻，記錄 340nm 處初 始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，計算ΔA=A1-A2。
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