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LyGreen核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實時定量PCR（qPCR）。該染料結構上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體，在沒有DNA存在時，該結構呈無熒光環狀結構，一旦有DNA出現，則恢復隨機形態并與DNA結合發出強烈的綠色熒光。
與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下優點：（1）靈敏度高：在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號（2）準確：結合雙鏈DNA，變形時染料不遷移，熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況。過量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。（3）穩定性好：在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。（4）安全：細胞膜穿透性測試表明，LyGreen幾乎不能穿透細胞膜。（5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時不需改變光譜元件設置，也無需改變操作步驟，qPCR完成后，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀察分析。（6）重復性好（如圖1）：特殊設計染料，相同反應體系下，熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關，線性。
應用實例
圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.
HRM分析設備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
LyGreen (20×in water) HRM染料（20×水溶液） | AN19L021 | 1ml |
LyGreen (20×in water) HRM染料（20×水溶液） | AN19L022 | 5 x 1ml |
運輸與保存方法
藍冰運輸。-20℃干燥避光保存，有效期12個月。
光學性質
激發波長= 497 nm
發射波長= 520 nm
實驗方法
PCR反應的配制（50 μL）
試劑 | 用量 |
ddH2O | 計算加水量，按終體積50 μL |
Taq DNA poLymerase | 5 U |
2mM的 dNTP | 5 μL |
50mM MgCl2 | 2.5 μL |
20 X LyGreen | 2.5 μL |
引物 | 0.1-1 μM（終濃度） |
注意事項
1. 請根據不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據所使用的Taq酶的不同進行適當優化。
2. 根據實驗用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應體系（1×Master mix）。
3. 將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應)。
4. 按照儀器類型選擇合適的擴增程序。
5. 做qPCR時注意設置陽性和陰性對照。
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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