日韩亚洲情Av无码,日韩亚洲AV无码精品影院,日韩人妻系列无码专区久久,亚洲无码日韩高清中文字幕

Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

產品描述
　　本試劑盒為Annexin V與PI聯合使用的試劑盒，用于檢測細胞凋亡早期的發生，可區分凋亡早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。
　　Annexin V為胞內蛋白膜聯蛋白家族成員，以鈣離子依賴的方式選擇性與磷脂酰絲氨酸(PS)結合。PS正常分布在細胞膜內側。PS外翻到細胞膜外是不同類型的細胞在凋亡早期的明顯特征，用帶有FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測到這一重要特征。FITC呈現黃綠色熒光。
　　PI（Propidium Iodide, 碘化丙啶）是一種可對 DNA 染色的細胞核染色試劑，在嵌入DNA 后釋放紅色熒光。PI不能穿透完整的細胞膜，但可以穿透壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞。
　　Annexin V-FITC與PI聯合使用時，PI 被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被 FITC 和PI 結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/PI+）。
　　FITC大吸收波長和激發波長分別為494nm和518 nm，PI-DNA復合物的大吸收和發射波長分別為535 nm和617 nm。

訂購信息

產品組分

保存方法
　　2~8℃避光保存，一年有效。注意不可冷凍。
使用方法
　　下列實驗方案以利用星形孢菌素誘導 Jurkat 細胞凋亡為例，如果使用其他誘導劑和其他類型的細胞，實驗條件需要略作調整。
1.流式細胞檢測
（1）根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為陰性對照。此外，建議設定一組樣品做單染，用于調節補償。
（2）收集細胞。
懸浮細胞：300 g，4℃離心 5 min 收集細胞；
貼壁細胞：用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g，4℃離心 5 min收集細胞，胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。
【注】：用胰蛋白酶消化然后使細胞在合適的細胞培養條件和培養基中恢復約30 min，然后再染色。 胰蛋白酶消化會暫時破壞質膜，允許Annexin V結合磷脂酰絲氨酸在細胞膜的細胞質表面上，從而導致假陽性染色。
（3）用預冷的PBS 洗滌細胞兩次，每次均在 300 g，4℃下離心 5 min，收集 1-5×10⁵ 個細胞并用100 μL 1×結合緩沖液重懸細胞。
（4）每管加入 4-5 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI工作液。
【注】：我們推薦準備兩管額外的流式管，每管只加入一種單染染料（FITC-Annexin V 和PI），用于流式單染的補償調節。
（5）室溫避光孵育 10-15 min，為避免細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作。
（6）每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結合緩沖液，盡快通過流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。FITC-Annexin V 可以由 488nm 激光激發，檢測熒光發射光譜約在 530 nm 處（FITC 通道），PI 通道發射光譜約在 617 nm 處。
【注】：PBS 或 1×結合緩沖液的選擇根據不同凋亡處理以及不同細胞具體選擇。
2.熒光顯微鏡檢測
對于懸浮細胞，可參照流式細胞檢測的方法進行具體操作。
（1）在蓋玻片或載玻片小室中接種細胞。
（2）根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為陰性對照。
（3）用 PBS 洗滌細胞。
【注】：細胞收集后如果不用 PBS 清洗，可以用含血清的培養基直接替代Annexin V 結合緩沖液，但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優化。
（4）每 100 μL 的 Annexin V 結合緩沖液中加入 5-25 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI。
【注】：合適的使用濃度由具體實驗要求確定。
（5）向培養板中加入足量的染液以覆蓋全部細胞，室溫避光孵育 15-30 min。為避免細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作，但孵育時間至少延長至 30 min。
（6）用 1×結合緩沖液清洗細胞。
（7）將孵育有細胞的蓋玻片置于載玻片上，載玻片可提前加一滴 1×結合緩沖液；對于培養在小室內的細胞，可直接加入足量的 1×結合緩沖液覆蓋細胞。
（8）使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細胞。FITC-Annexin V 可用 FITC 適用的濾光片，PI 可用 Cy3 或者 Texas。
注意事項：
1.該產品*于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2.熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。