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抗 DIA 血型檢測試劑

Diego 血型系統及抗 Dia 試劑簡介

Diego 血型系統于 1955 年被發現，并以FIRST產生針對該血型系統抗原的患者命名。抗 Dia 和抗 Dib 與新生兒溶血病（HDN）的關聯性較輸血反應更高。由 Diego 抗體引發的 HDN 在東南亞和南美洲更為常見。抗 Dia 可導致中度至重度 HDN，已有相關病例報告。

原理

該試劑在抗球蛋白檢測階段，會使攜帶相應 Dia 抗原的紅細胞發生間接凝集現象。通常無凝集表明相應 Dia 抗原缺失（詳見限制條件）。

試劑

美德聲提供的人抗 Dia 血型試劑由人血清稀釋于含大分子增強劑和牛血清白蛋白的氯化鈉溶液中制備而成。每種試劑均按最佳稀釋比例供應，適用于所有推薦檢測技術，無需進一步稀釋或添加。批號參考和有效期見瓶簽。

儲存和穩定性

試劑瓶到貨后應于 2 - 8°C 下儲存。長時間在此溫度范圍外儲存可能導致試劑活性加速喪失。該試劑已按 BS EN ISO 23640:2015 文件要求，完成 37°C 和 -25°C 下的運輸穩定性研究。

樣本采集和準備

血液樣本可采集于含 EDTA、檸檬酸鹽、CPDA 抗凝劑的試管中，或作為凝固樣本。樣本應盡快檢測。若檢測延遲，需于 2 - 8°C 下儲存。有明顯溶血或微生物污染的樣本不得用于檢測。顯示裂解跡象的血液樣本可能導致結果不可靠。檢測前用 PBS 或等滲鹽水洗滌所有血液樣本更佳，但非必需。

質量控制與建議

1. 建議每批檢測同時進行陽性對照（最好是雜合子細胞）和陰性對照。若對照結果不符合預期，則檢測結果無效。

2. 抗球蛋白技術只有在所有陰性檢測結果與 IgG 致敏紅細胞反應呈陽性時才有效。

3. 試劑中含大分子增強劑，可能與 IgG 致敏細胞產生假陽性反應，建議用患者血漿測試患者細胞以檢測假陽性反應。

4. 在管技術中，使用瓶裝滴管時，一體積約為 50µl。

5. 試劑的使用和結果解讀必須由經過適當培訓和資質的人員，按照試劑使用國家的要求進行。

所需材料

• 抗人球蛋白

• Bio-Rad ID 卡（LISS/Coombs 或抗 IgG）

• Bio-Rad ID 離心機

• Bio-Rad ID-CellStab

• Bio-Rad ID 孵箱，溫度設定為 37°C ± 2°C

• 玻璃試管（10 x 75 mm 或 12 x 75 mm）

• IgG 致敏紅細胞

• Ortho BioVue 系統設備（AHG 多特異性或抗 IgG）

• Ortho BioVue 系統離心機

• Ortho BioVue 系統加熱塊，溫度設定為 37°C ± 2°C

• Ortho 0.8% 紅細胞稀釋液

• PBS 溶液（pH 6.8–7.2）或等滲鹽水溶液（pH 6.5–7.5）

• 陽性（最好是雜合子）和陰性對照紅細胞

• 量筒移液管

• 水浴或干式加熱孵箱，溫度設定為 37°C ± 2°C

使用說明

 間接抗球蛋白技術（IAT）

1. 用 PBS 或等滲鹽水制備 2-3% 的紅細胞懸浮液。

2. 在標記好的試管中加入一體積的  試劑和一體積的紅細胞懸浮液。

3. 充分混合后，在 37°C 下孵育 15 分鐘。

4. 用 PBS 或等滲鹽水洗滌紅細胞 4 次，注意每次洗滌后傾倒鹽水并重新懸浮紅細胞。最后一次洗滌后傾倒鹽水。

5. 向每個干燥的紅細胞按鈕中加入兩體積的抗人球蛋白或抗 IgG。

6. 充分混合后，將所有試管以 1000 rcf 的相對離心力或合適的替代時間和力離心 20 秒。

7. 輕輕重新懸浮紅細胞按鈕并宏觀觀察凝集情況。

8. 用 IgG 致敏紅細胞確認所有陰性反應的有效性。

 Bio-Rad-ID 微量分型技術

1. 在 ID-Cellstab 或 ID 稀釋液 2 中制備 0.8% 的紅細胞懸浮液。

2. 從 LISS/Coombs 或抗 IgG ID 卡中取下所需數量的微量管的鋁箔。

3. 在適當的微量管中加入 50µl 的 0.8% 紅細胞懸浮液和 25µl 的試劑。

4. 在 37°C 下孵育 ID 卡 15 分鐘。

5. 在 Bio-Rad ID 離心機中離心 ID 卡。

6. 宏觀觀察凝集情況。

 Ortho BioVue 分型技術

1. 在 0.8% Ortho 紅細胞稀釋液中制備 0.8% 的紅細胞懸浮液。

2. 從 AHG 多特異性或抗 IgG 設備中取下所需數量的反應室的鋁箔。

3. 在適當的反應室中加入 50µl 的紅細胞懸浮液和 40µl 的試劑。

4. 在 37°C 下孵育盒 15 分鐘。

5. 在 Ortho BioVue 系統離心機中離心盒。

6. 宏觀觀察凝集情況。

結果解讀

1. 陽性：紅細胞凝集為陽性結果，在檢測程序的可接受限制內，表明紅細胞上存在 Dia 抗原。

2. 陰性：紅細胞無凝集為陰性結果，在檢測程序的可接受限制內，表明紅細胞上不存在 Dia 抗原。

性能特征

1. 試劑已通過推薦技術中的程序進行了表征。

2. 在放行前，每批抗 Dia 試劑均通過推薦技術對一系列抗原陽性紅細胞進行測試，以確保合適的反應性。

3. 已排除在隨機人群中發病率為 1% 或更高的抗原的污染抗體，這通過使用適當的抗原陰性紅細胞進行測試或通過使用之前已吸收去除干擾特異性的試劑進行測試來實現。

4. 在常規特異性測試中可能無法排除針對 Xga、Doa、Yta、Cob、Wra、Bga 和 Vw 的抗體，這取決于是否有合適的測試細胞可用。對于 Ytb、Mg 和 Vw 以及其他低頻抗原，也是如此。

5. 試劑的質量控制使用的是在使用前已用 PBS 或等滲鹽水洗滌兩次的紅細胞。

6. 試劑符合英國血液輸注服務指南最新版本中的建議。

儲存溫度 2 - 8°C

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