詳細介紹
產品屬性:
英文名稱:PF-06447475
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg
發貨周期:1~3天
公司產品僅用于科研
商品介紹:
PF-06447475是高效選擇性有鬧滲透性的LRRK2抑制劑,IC50值為3nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1527473-33-1 純度:99.62% 分子式:C??H??N?O 分子量:305.33 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調控;
⑤細胞分化及其調控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
馬泰勒蟲(青海剛察株)成熟T淋巴增殖蛋白1抗體Human NR2C1(Nuclear receptor subfamily 2 group C member 1) ELISA Kit犬尿(KYN)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激8相互作用蛋白1抗體Human NR2B ELISA Kit糖還原(AR)ELISA Kit
牛瘟病肌球蛋白輕鏈6抗體Human NOVA2 ELISA Kit縮(ALD)ELISA Kit
副結核補體結合試驗(-)陰性血清磷化肌增強因子2C抗體Human F2R(Proteinase-activated receptor 1) ELISA Kit固(ALD)ELISA Kit
土壤短芽胞桿菌磷化黑色瘤粘附分子CD146抗體Human NOX3(NADPH oxidase 3) ELISA Kit全段甲狀旁腺(i-PTH)ELISA Kit
琥珀乳牛肝菌肌增強因子2C抗體Human NOXA2/p67phox ELISA Kit去乙?;疭irtuin-7(SIRT7/SIR2L7)ELISA Kit
大腸埃希菌促黑激γ1抗體Human NMUR1 ELISA Kit去乙?;疭irtuin-6(SIRT6/SIR2L6)ELISA Kit
干酪乳桿菌小鼠抗激-M2抗體Human NNT ELISA Kit去乙?;疭irtuin-5(SIRT5/SIR2L5)ELISA Kit
貝萊斯芽胞桿菌甲基化多聚腺苷結合蛋白抗體Human NPAS1 ELISA Kit去乙酰化Sirtuin-4(SIRT4/SIR2L4)ELISA Kit
灰離褶傘有絲分裂原誘導基因6抗體Human NNT ELISA Kit去乙?;疭irtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)ELISA Kit
平菇線粒體融合蛋白Mfn2抗體Human NMUR1 ELISA Kit去乙?;疭irtuin-1(SIRT1/SIR2L1)ELISA Kit
地衣芽孢桿菌珠蛋白1抗體Human NOXA2/p67phox ELISA Kit去乙酰化饑餓激(dGHRL)ELISA Kit
迂回殼囊孢肌球蛋白輕鏈9抗體Human NPAS1 ELISA Kit去唾液糖蛋白受體(ASGPR)ELISA Kit
香菇磷化肌球蛋白輕鏈9抗體Human NO66/C14orf169 ELISA Kit去唾液糖蛋白受體(AGSPR)ELISA Kit
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)NADH復合體1抗體Human NPAS3 ELISA Kit去甲腎上腺(NE)ELISA Kit
雙環林地蘑菇癌相關抗原抗體Human NOB1 ELISA Kit去甲腎上腺(NA)ELISA Kit
微桿菌Microbacterium│sp. 質量規格:pH指示劑羥基積雪草
紅曲霉Monascus│sp. 質量規格:pH指示劑積雪草
紅球菌Rhodococcus│sp. 質量規格:>95.0%(T)羥基積雪草苷
LRRK2抑制劑(PF-06447475)polyprotein (DHAV) 鴨型肝炎A病抗體異戊酯 99%
Desmin 結蛋白抗體異戊酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG
DIO2 脫2抗體異戊酯 ≥99.7% (GC)
DISC1 (CT) DISC1 C端抗體油酯 75.0% (GC)
DISC1(NT) DISC1 N端抗體油酯 98%
DLK1 穿膜蛋白DLK1抗體酯 ≥99.5% (GC)
DLX4 DLX4抗體酯 ≥98%, FCC, FG
DKK1 抑癌蛋白DKK1抗體酯 99%
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)