人角膜內皮原代細胞

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

人角膜內皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜的高度透明性和光學性是正常發揮生理功能的必要條件之一，而角膜內皮細胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內皮細胞是角膜內層的單層細胞，構成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調節角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內皮細胞功能出現紊亂，常導致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內皮細胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內皮細胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內Na+梯度，防止水分滲入角膜內，維持角膜實質層相對脫水狀態，維持透明性。

方法簡介：

公司實驗室分離的人角膜內皮細胞采用混合膠原酶消化結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人角膜內皮細胞經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續實驗)

1、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培養箱中靜置 6-8 小時，以穩定細胞狀態。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養基，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養瓶中，37℃消化 3min 左右；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的培養基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養箱中培養。

4)待細胞貼壁后，培養觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養基。

CHO-AA8細胞，轉入Tet-off調控含EGFP基因的CHO細胞 H9c2(2-1)(大鼠心肌細胞) 615小鼠前胃癌瘤株;Fc  人纖維環細胞HAFC  SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞 小細胞肺癌細胞,NEI-H209細胞 ECV304(人臍靜脈內皮細胞株) 小鼠原代心臟微血管內皮細胞 大鼠原代腹膜間皮細胞

糖蛋白130(gp130)重組蛋白 Recombinant Glycoprotein 130 (gp130)

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 (His & Fc 標簽)

LAYN重組人 Layilin / LAYN 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H1N2 重組甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CLEC2B重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

兔子促黃體激素(LH)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cadherin complex (VE-cad) ELISA Kit 人血管內皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)試劑盒

Humanai-neuophilaibody,ANAELISAKit 人抗中性粒細胞抗體(ANA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanerythrocytemembraneprotein,EMP試劑盒人紅細胞膜蛋白(EMP)試劑盒規格：96T/48T

組織RSE激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanOsteoprotegerin，OPGELISAKit人骨保護素(OPG)試劑盒規格：96T/48T

人轉錄因子   英文名稱：   Human Engrailed-2   規格：      

E選擇素   英文名稱：   Human E selectin   規格：        

上皮鈣粘蛋白   英文名稱：   Human E.cadherin   規格：    cn

內皮素受體A   英文名稱：   Human Endothelin Receptor A   規格：      英文縮寫：   EA

人角膜內皮原代細胞豚鼠干擾素α(IFNα)試劑盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體(VGCC)試劑盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封閉抗體

線蟲基因組DNA分離試劑盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)試劑盒規格：96T/48T

CXADR重組小鼠 CXADR / CAR 蛋白 Protein

骨成型蛋白2(BMP2)重組蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)

PDHA1重組人 PDHA1 / C54G1 蛋白 (aa 30-390, His & GST 標簽) Protein

CEACAM3 Protein Human 重組人 CEACAM3 / CD66d 蛋白

TGFB2 Protein Canine 重組狗 TGFB2 / TGF-beta 2 蛋白