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線性PEI轉染試劑- KE1082

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更新時間:2025-02-04 12:52:02瀏覽次數:974次

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供貨周期 現貨 規格 0.1ml
貨號 KE1082 應用領域 醫療衛生,環保,生物產業,石油
主要用途 適用于常見細胞系
線性PEI轉染試劑- KE1082 線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,它能與核酸形成復合物,并使該復合 物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣泛適用于常見細胞系

線性PEI轉染試劑- KE1082

用途:用于轉染核酸到哺乳動物細胞

產品編號:KE1082

包裝規格:0.1ml

儲存條件:4℃

產品概述 :

線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,它能與核酸形成復合物,并使該復合 物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣泛適用于常見細胞系,如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等。該試劑即使在有血清存在的情況下, 它仍然能高效的將核酸導入細胞。

線性PEI轉染試劑具有如下優點:

*的轉染效率

重組蛋白的高表達水平

與含血清的培養基相兼容

低細胞毒性,易于操作

質量控制:

每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將 eGFP 表達質粒用 PEI轉染試劑轉入亞融合狀態的293T細胞,轉染 16 h 后, 超過 95%的細胞表達 eGFP。

線性PEI轉染試劑- KE1082注意事項 :

一.質粒質量,請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度,260 nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度(比值應該在 1.8~2.0 的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

二.細胞條件,使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO公司血清培養細胞。

瞬時轉染方法

  • 接種細胞, 轉染前一天,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用yimei)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

二.準備 DNA-PEI 復合物, DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 Falcon 5 mL /14 mL 離心管。

三.轉染細胞,直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加1/2體積的包含 30%血清的生長培養基。

四.孵育細胞和分析結果,在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

穩定轉染方法

一.接種細胞,轉染前一天,用yimei消化細胞并計數。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

二.準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙 烯管,例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

三.轉染細胞,直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加1/2體積的包含 30%血清的生長培養基。

四.孵育細胞和分析結果: 在 CO2培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

五.轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

特別提醒

一. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞 的匯合度仍為 70~80%。

二.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

三. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養基以達到轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。

四.對大多數細胞而言,每1ug使用3.0ulKingmorn® DNA transfection reagent轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每 1 ugDNA 使用 1~4 ul體積線性PEI轉染試劑進行優化。

五.參考用量

細胞培養容器

表面積

稀釋液體積

DNA的量

PEI溶液的量

培養基總量

96-well

0.3cm2

10uL

0.1ug

0.1uL

100uL

48-well

0.7cm2

20uL

0.2ug

0.3uL

200uL

24-well

1.9cm2

50uL

0.5ug

1uL

500uL

12-well

3.8cm2

50uL

1ug

2uL

1mL

6-well/35mmdish

10cm2

100uL

2ug

4uL

2mL

60mm dish/T25flask

21cm2

200uL

4ug

8uL

4mL

100mmdish/T75flask

58cm2

500uL

10ug

20uL

10mL


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