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細胞培養的基本原理與技術 現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術,而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系,特別是在醫藥領域的發展,細胞培養更具有特殊的作用和價值。
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更新時間:2024/07/29 21:57:49瀏覽次數:1480
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HT144人惡性黑色素瘤細胞
組織來源:皮膚
培養條件:McCoy 5a+10%FBS
形 態:貼壁;成纖維細胞樣
1. 在HT-144細胞還沒有*長滿的時候就要傳代,覆蓋瓶底大約70%的時候就開始傳代;
2.不存在消化時間太長的說法,我的細胞所有的細胞都在37°消化5-10分鐘,你的一分鐘肯定不會有問題;
3.明確你的消化液里面有沒有EDTA,這個東西會很強烈地抑制細胞貼壁,如果有的話,你要用新的瓶子傳代,原來的培養瓶或者培養皿都不要了,這樣會好些,如果你要反復使用培養皿的話,要用大量的PBS洗,再用含血清的培養基洗一次才能繼續用;
4.你消化HT-144細胞之后有沒有離心清洗細胞,細胞消化下來之后要用含10ml血清的培養基離心洗一次;
0.05%的胰酶還是0.25%的胰酶原理是底濃度胰酶作用時間長些,細胞能盡量散些是目的,胰酶保存的好,效果就好。
消化之前先用PBS洗兩次,然后加0.05%的胰酶消化2min,然后把胰酶吸棄,利用余下的胰酶消化3-5min(室溫或培養箱),HT-144;人惡性黑色素瘤細胞;HT-144細胞這期間每隔一分鐘在顯微鏡下觀察,看到細胞差不多都變圓了、且側立細胞有滑落的趨勢,加2ml培養基吹打,吹成單細胞懸液。我的細胞這樣差不多就能吹散了。
HT-144細胞一團一團的,是傳代的時候沒吹散。37度消化4分鐘,拿前面較細的1ml槍頭吹的,然后就差不多能成單細胞了。你可以吹完后把它轉移到離心管中,讓它自然沉降8-10分鐘,然后取上層的細胞傳代,情況會好很多。
細胞聚團還有一種可能是您使用的胎牛血清營養成份不夠,建議復蘇一只新的細胞再培養。
HT144人惡性黑色素瘤細胞
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