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PC3人胰腺癌細胞

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更新時間:2024/07/31 09:47:09瀏覽次數(shù):2422

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨
PC3人胰腺癌細胞
細胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認為包括基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。

詳細介紹

PC3人胰腺癌細胞

細胞特性

1)來源:胰腺癌

2)形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長

3)含量:>lxl06 個/mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝

運輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后,請先在顯微鏡下檢查細 胞生長狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,再次檢查細胞狀態(tài)。若狀 態(tài)良好,可進行細胞后續(xù)處理操作,按照以下方式進行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請 及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞用途:僅供科研使用。

PC3人胰腺癌細胞

細胞培養(yǎng)步驟

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1.準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K : GIBCO,貨號:21127-022);北美胎牛血清,10%; PS 1%。

2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。

3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

2)細胞處理:

1. 復(fù)蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細胞密度。

2.細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。

按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分 鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。

3.細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例;

細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,細 胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存 管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

注意事項:

收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染, 請立即與我們聯(lián)系。

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作, 并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

 

 

 

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