詳細介紹
細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYM培養
形態特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一成年女性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYM培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-CD8/PE 熒光素藻紅蛋白標記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Artemin抗體 Anti-ART 0.1ml
ZBTB25 英文名稱: 鋅指蛋白46抗體 0.2ml
DAP1 英文名稱: 死亡相關蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E結合蛋白抗體 規格 0.1ml
EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
USF-1(upstream stimulatory factor 1) 上游刺激因子1抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCNA-Proliferation Marker 增殖細胞核抗原抗體 規格 0.1ml
DKK3 Kit Human 人 DKK3 / Dkk-3 / REIC ELISA配對抗體 ELISA
TMEM2L 英文名稱: 跨膜蛋白2樣蛋白抗體 0.2ml
CEBP Beta 英文名稱: 轉錄調節因子C/EBP β抗體 0.1ml
Anti-Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
人多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP-1)ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠α肌動蛋白(α Actin)ELISA試劑盒,英文名:α Actin ELISA Kit人的兒茶酚氧位甲基轉移酶(COMT)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒,英文名:BALP ELISA KiISA Kit for Human T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒,英文名:E ELISA Kit人胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠γ-氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒,英文名:GABA ELISA KiISA Kit for Human Monocyte differentiation antigen CD14小鼠cAMP反應元件結合蛋白(CREB)ELISA試劑盒,英文名:CREB ELISA Kit人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠白細胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒,英文名:IL-6 ELISA KiISA Kit for Human Protein deltex-1小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA試劑盒,英文名:MUC5B ELISA Kit
人含蛋白2激進的S-腺苷甲硫氨酸域(RSAD2)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠白細胞介素10(IL-10)ELISA試劑盒,英文名:IL-10 ELISA KiISA Kit for Human Endoglin小鼠微粒體谷胱甘肽S轉移酶1(MGST1)ELISA試劑盒,英文名:MGST1 ELISA KiISA Kit for Human Heparin-binding growth factor 2小鼠巰基丙酮酸硫轉移酶(MPST)ELISA試劑盒,英文名:MPST ELISA KiISA Kit for Human Gastrin小鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒,英文名:KLK4 ELISA KiISA Kit for Human 10 kDa heat shock protein, mitochondrial小鼠防御素β2(DEFβ2)ELISA試劑盒,英文名:DEFβ2 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-22小鼠白介素27(IL27)ELISA試劑盒,英文名:IL27 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-15小鼠CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒,英文名:CD40L ELISA Kit
山羊抗大鼠 IgG(H+L)/Biotin 0.1ml 美國Jackson公司分裝
VAT1 英文名稱: 嗜鉻顆粒胺轉運蛋白VAT1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相關激酶抗體 規格 0.1ml
Neurocan 神經粘蛋白抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
DAP12 英文名稱: 自然殺傷激活受體相關蛋白DAP12抗體 0.1ml
Anti-ATH III 凝血酶Ⅲ抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
VEGF-C ELISA Kit 大鼠血管內皮細胞生長因子CMulti-class antibodies規格: 48T
Anti- Gamma-Adaptin/FITC 熒光素標記銜接蛋白γ抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM82A1/RMD2 微管動力調節蛋白2抗體 規格 0.2ml
8-OHdG(Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine) ELISA Kit 小鼠8羥基脫氧鳥苷 96T
Myocardin 英文名稱: 促血管平滑肌細胞分化因子抗體 0.2ml
Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198) 英文名稱: 磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體 0.1ml
Anti- Gamma-Adaptin/FITC 熒光素標記銜接蛋白γ抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。