詳細介紹
一、細胞基本屬性
產品名稱 | 產品規格 | 商品貨號 |
小鼠胃平滑肌細胞 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | A01X1803 |
組織來源:胃組織
種屬來源:小鼠
細胞簡介:小鼠胃平滑肌細胞分離自胃組織;胃柔軟,活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞,充盈時變平坦。胃壁由粘膜、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構成。粘膜上皮為柱狀上皮。上皮向粘膜深部下陷構成大量腺體(胃底腺、賁門腺、幽門腺),它們的分泌物混合形成胃液,對食物進行化學性消化。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環狀的皺襞叫幽門瓣。胃肌膜由三層平滑肌構成,外層縱形,中層環形,內層斜行,其中環形肌發達,在幽門處特別增厚形成幽門括約肌。胃平滑肌細胞源自胃的平滑肌層,細胞通過緊密連接,進行同步性運動,完成肌肉的舒縮活動,以推動食物前進,完成對食物的機械性消化,并促進化學性消化和吸收。胃平滑肌具有肌組織的共同特性,如興奮、自律性、傳導性和收縮性,在離體后,置于適宜的環境內,仍能進行良好的節律性運動,但其收縮很緩慢,節律性遠不如心肌規則。胃平滑肌對電刺激較不敏感,但對于牽張、溫度和化學刺激則特別敏感,輕微的刺激常可引起強烈的收縮。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環境分不開的,胃內容物對平滑肌的牽張、溫度和化學刺激是引起內容物推進或排空的自然刺激因素。
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%胰dan白酶
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
二、細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
三、使用方法
小鼠胃平滑肌細胞是一種貼壁細胞,細胞形態呈成纖維細胞樣,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;
4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化;
3)經1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養基重懸沉淀,接種于新的培養瓶內;
4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
四、注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和技術部溝通;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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