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CAS：70363-83-6，DiBAC4(3)熒光探針

CAS：70363-83-6，DiBAC4(3)，細胞膜電位熒光探針

CAS#：70363-83-6

英文名：Bis(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol

分子式：C27H39N4O6

分子量：515.62

結(jié)構(gòu)式：

性質(zhì)：

1. 外觀：紅色粉末

2. 純度：≥98%

3. 產(chǎn)品描述：

DiBAC4(3)是一種檢測細胞膜電位的親脂性陰離子熒光染料，它本身無熒光，當進人細胞與胞漿內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合后才發(fā)出熒光。DiBAC4(3)進入細胞，細胞內(nèi)熒光強度增加，即膜電位增加表示細胞去極化；反之，細胞內(nèi)熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。

4. 溶解及使用方法：

可以使用DMSO、無水乙醇和純水溶解，用DMSO溶解成10mM的母液儲存，如果低濃度也可以滿足要求也可用純水溶解。

I. 用熒光顯微鏡測定膜電位的方法

（1）試劑

·DiBAC4(3)

·Dulbecco’s MEM (DMEM)

·FBS (fetal bovine serum)

（2）方法

1) 將消化好的細胞移至DMEM中。

2) 加入FBS，控制濃度范圍在：2～15% 。

3) 加入DiBAC4(3)，控制濃度范圍在：1～5 µmol/L。

4) 用熒光顯微鏡觀察刺激后熒光強度的變化。[Ar激光(488 nm) 的激光共聚焦顯微鏡]，由于DiBAC4(3)的熒光會隨溫度變化而改變，所以必須在37℃的條件下測定。由于細胞膜的電位會變化，可以觀察細胞質(zhì)內(nèi)的熒光強度變化。 

II. 用酶標儀測定膜電位的方法

（1）試劑

·DiBAC4(3)

檢測用緩沖液 (pH7.4; 20 mmol/L HEPES, 120 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KCl, 2 mmol/L CaCl2, 1 mmol/L MgCl2,5 mmol/L glucose)

（2）方法

1) 培養(yǎng)細胞：在微孔板中培養(yǎng)細胞

2) 清洗細胞：用含5 µmol/L DiBAC4(3) 的檢測用緩沖液200 µL，清洗微孔板中培養(yǎng)的細胞2次

3) 染色：在孔板中加入180 µL含5 µmol/L DiBAC4(3) 的檢測用緩沖液，在5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。

4) 測定：用熒光酶標儀觀察刺激后熒光強度的變化。由于DiBAC4(3)的熒光會隨溫度變化而改變，所以必須在37℃的條件下測定，加入20 µL含DiBAC4(3) 的檢測用緩沖液，每隔30秒測定1次熒光變化。 

III. 膜電位的標準曲線

（1）原理

膜電位變化時色素的分布也隨之變化，所以熒光和吸收也會變化。這種變化程度取決于色素的分子數(shù)和細胞數(shù)的比率、色素的濃度以及細胞的種類。膜電位的標準曲線是通過用電極直接測定目的細胞的膜電位，在該電位所測得的熒光和吸收強度而制得的。 

（2）試劑

·DiBAC4(3)

·Eagle-Dulbecco medium

·PBS

（3）方法

1) 用Eagle-Dulbecco medium培養(yǎng)細胞。

2) 取PBS中的細胞在37℃的CO2培養(yǎng)箱中孵育30～60分鐘，然后改變孵育時間，制備不一樣的CO2濃度的樣品。

3) 加入DiBAC4(3)，終濃度為2 µmol/L。

4) 20分鐘后，在517 nm測定各個濃度的熒光強度，并用電極直接測定此時的電位差。

5) 用熒光強度和對應的電位差來制作標準曲線。 

（4）其他方法

有鉀擴散電位和熒光或吸收強度比較的方法。纈氨霉素引起鉀擴散電位，鉀擴散電位 (V) 是按照Nernst 方程計算如下：

V= -RT／F log[K+]in／[K+]out = -59 log[K+]in／[K+]out (mV) 

所以在纈氨霉素存在時，通過改變細胞外鉀離子濃度和細胞內(nèi)鉀離子濃度，計算擴散電位，測定各個電位的熒光或吸收強度，比較后可以得到標準曲線。

儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

供應商：杭州新喬生物科技有限公司

CAS：70363-83-6，DiBAC4(3)熒光探針

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