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62ST3PEC | HTRF KINEASE STK S3 KIT | 20K PTS |
HTRF KinEASE 試劑盒系列提供了一種簡單的生化方法來研究激酶活性、篩選抑制劑并對其進行表征。三個絲 / 蘇激酶(STK)試劑盒和一個酪激酶(TK)試劑盒分別提供了一種半通用的方法來評估絲 / 蘇和酪殘基上的磷酸化。HTRF KinEASE STK S3 檢測已在 43 種絲 / 蘇激酶上進行了驗證。本頁面的檢測驗證部分列出了這些激酶,并提供了設置的技術提示。該試劑盒系列還包括一個探索試劑盒,以幫助在使用未經驗證的酶時確定三個 STK 試劑盒中的哪一個是合適的。
檢測原理:
每個 HTRF KinEASE 試劑盒基于相同的檢測形式,并使用通用的化底物、磷酸化特異性銪穴狀化合物標記的單克隆抗體和 SA - XL665。所有三個 STK 肽底物在用于抗體檢測的序列部分是相同的,旁邊是被酶識別的可變序列。用于磷酸化的靶向殘基位于兩者之間,既是酶活性(未磷酸化)序列的一部分,也是抗體檢測(磷酸化)序列的一部分。已經表明,三種不同的可變序列可以用于研究大多數絲 / 蘇激酶。
檢測方案:
如圖所示,所有的 HTRF KinEASE 檢測方法都以相同的方式工作,涉及兩個步驟:
步驟 1:激酶反應 將激酶在有或沒有化合物和適當底物的情況下孵育。僅對于酪激酶,在激酶緩沖液中加入補充的酶促緩沖液。加入 ATP 以啟動反應。
步驟 2:檢測 加入銪穴狀化合物和 XL665 偶聯物。檢測緩沖液中含有 EDTA 以停止酶促反應。
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