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Ni-NTA蛋白純化樹脂 試劑是一種親和層析基質,用于純化攜帶His標簽的重組蛋白。
His標簽中的組氨酸殘基以高特異性和親和性結合到固定鎳離子配位球的空位上。
清除的細胞裂解物被裝載到基質上。他標記的蛋白質結合在一起,其他蛋白質穿過基質。
洗滌后,his標記的蛋白質在天然或變性條件下在緩沖液中洗脫
QIAexpress Ni-NTA蛋白純化系統是基于Ni-NTA(鎳-硝基三乙酸)樹脂
對含有6個或更多組氨酸殘基(連續或交替)親和標簽- His標簽的蛋白質的顯著選擇性。
該技術允許在原生或變性條件下從任何表達系統中一步純化幾乎任何his標記的蛋白質。
NTA對鎳離子有四個螯合位點,與金屬螯合凈化系統相比,它能更緊密地結合鎳,
而金屬螯合凈化系統只有三個位點可與金屬離子相互作用。
額外的螯合位點防止鎳離子浸出,并導致更大的結合能力和更高純度的蛋白質制備,
比使用其他金屬螯合純化系統獲得的。QIAexpress系統可用于從任何表達系統中純化his標記蛋白,
包括桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌 his標記蛋白的純化包括4個階段:
細胞裂解、結合、洗滌和洗脫(見用Ni-NTA蛋白純化系統純化蛋白質)。
使用QIAexpress系統純化重組蛋白不依賴于蛋白質的三維結構或6xHis標簽。
這允許一步蛋白質純化在原生或變性條件下,從稀溶液和粗裂解物。
強變性劑和清潔劑可用于有效的增溶和純化受體、膜蛋白和形成包涵體的蛋白質。
能夠有效去除非特異性結合污染物的試劑可以包括在洗滌緩沖液中(見表)。
通過加入100-250 mM咪唑作為競爭對手或降低pH值,在溫和條件下洗脫純化的蛋白質
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