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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>抗原抗體>> P11110LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8

LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8
  • LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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  • 品牌 其他品牌
  • 型號 P11110
  • 廠商性質 代理商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-11-12 10:55:39瀏覽次數:737評價

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供貨周期 一個月 應用領域 醫療衛生,環保,化工,生物產業,綜合
LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8,產品編碼:P11110。
它有兩種規格:1ML、5ML。

LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8,產品編碼:P11110。

LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8描述

它為即用型試劑,使用方法十分便捷,可用于大批量樣品的檢測。對細胞無明顯毒性,加入CCK-8溶液顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀板,使檢測時間更加靈活,便于找到最佳測定時間,可應用于細胞增殖和細胞生長抑制檢測、毒性測定、藥物篩選、腫瘤藥敏等試驗。

Cell Counting Kit-8,簡稱CCK-8或CCK8試劑盒,是一種基于WST-8(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒,是MTT、XTT、MTS等的優良替代方法。


WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan (圖1) 。對于相同起始量的細胞,細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同種細胞,顏色的深淺 (生成的formazan量) 與細胞數目呈線性關系 (圖3) 。


LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8

圖1. WST-8檢測原理圖(EC=electron coupling reagent,即電子耦合試劑)


WST-8是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有以下明顯的優點:(1) MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶液來溶解,而WST-8和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的,可以省去后續的溶解步驟,WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。(2) WST-8比XTT、MTS更加穩定,使實驗結果更加可靠。(3) WST-8和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高。


Cell Counting Kit-8 CCK-8為即用型試劑,使用方法十分便捷,無須再進行任何配制等操作,無須使用同位素,所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內即可完成。不必洗滌細胞,不必收集細胞,也不必采用額外的步驟溶解formazan,可以用于大批量樣品的檢測。同時,WST-8對細胞無明顯毒性,加入CCK-8溶液顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀板,使檢測時間更加靈活,便于找到最佳測定時間。Cell Counting Kit-8 CCK-8可以應用于細胞增殖和細胞生長抑制檢測、毒性測定、藥物篩選、腫瘤藥敏等試驗。



02/產品組分


                                     LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8



03/保存條件


冰袋(wet ice)運輸。4℃避光保存,有效期12個月。-20℃避光保存,有效期24個月。



04/產品特點

即用型試劑,無須再進行任何試劑的配制

對細胞無明顯毒性,檢測時間更加靈活,可在不同時間點反復/連續讀值

顯色穩定,使實驗結果更加可靠

線性范圍寬,靈敏度高

可用于大批量樣品的檢測



05/實驗流程概要

LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8



06/實驗步驟


一. 制作標準曲線(使用此標準曲線的前提條件是試驗條件*一致)

1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液的細胞數量,然后接種細胞;

2.按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般需要做5-7個細胞濃度梯度,每組4-6 個復孔;

3. 接種后培養4-6小時使細胞貼壁(懸浮細胞可省略此步驟);

4. 加入LeapWal Cell Counting Kit-8試劑(每100μL培養基加10μL CCK-8)。培養一定時間(0.5-4小時)后測定OD450,制作出一條以細胞數量為橫坐標,OD450為縱坐標的標準曲線,根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。


二. 細胞活性檢測

1. 在 96 孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養16-24小時;

2. 向每孔中加入10μL CCK-8溶液,切勿產生氣泡,氣泡會影響OD值的讀數;

3. 將培養板置于培養箱內孵育0.5-4小時;

4. 用酶標儀測定450nm處的吸光度。


三. 細胞增殖-毒性檢測

1. 在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔),將培養板放在培養箱中預培養16-24小時;

2. 向培養板加入不同濃度的待測藥物(依據實驗者具體方案而定);

3. 將培養板置于培養箱內孵育一段時間(依據實驗者具體方案而定);

4. 向每孔加入10μL CCK-8溶液,切勿產生氣泡,氣泡會影響OD值的讀數;

5. 將培養板置于培養箱內孵育0.5-4小時;

6. 用酶標儀測定450nm處的吸光度。

如果待測物質有氧化性或還原性,可在加入CCK-8之前,棄去舊培養基,用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基,來去除藥物的影響。當藥物影響較小時,也可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白對照孔的吸光度值即可。



07/計算公式


細胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 實驗孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8溶液和藥物溶液)

Ac: 對照孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8溶液,不含藥物)

Ab: 空白孔吸光度(含培養基、CCK-8溶液,不含細胞、藥物)



08/適用范圍


1. 細胞增殖測定:CCK-8是水溶性的,在培養基中穩定且無毒。

2. 細胞活性和細胞毒性分析:代謝活性以及染料的形成與細胞的活性和損傷成比例。

3. 細胞因子分析:測定細胞因子誘導的增殖,必要時,可在試驗結束時回收和擴增細胞。



09/注意事項


1. 使用96孔板進行檢測時,需考慮液體蒸發問題。由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,建議棄用周圍一圈,改加等量的PBS、水或培養液。

2. 細胞增殖實驗建議每孔加入100μL 2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100μL 5000個細胞(具體每孔所用的細胞數目,需根據細胞大小、細胞增殖速度等因素決定)。按照實驗需要進行培養并給予0-10μL 特定的藥物刺激。

3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,還原劑(例如,抗氧化劑)會干擾檢測結果,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設法去除。

4. 測試藥物如含有金屬,對CCK-8顯色會有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5%,15%,90%的顯色反應,使靈敏度降低。如果終濃度是10mM,將會100%抑制,需設法去除。

5. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果,酚紅的吸光度可以在計算時通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

6. 檢測時,如果起始培養體積為100μL,每孔加入10μL CCK-8溶液。如果起始培養體積為200μL,則需加入20μL CCK-8溶液,其它情況以此類推。可以用加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

7. CCK-8的培養時間一般為0.5-4小時,對于大多數情況孵育1小時即可。孵育時間的長短需根據細胞類型和細胞密度等實驗情況而定,需要摸索條件,初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續實驗。

8. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

9. 酶標儀檢測前需確保孔內沒有氣泡,否則會干擾測定結果。

10. 需要測定細胞的具體數量時,建議同時做標準曲線。

11. 若檢測樣本較多,建議采用多通道移液器,以減小工作量及平行孔間的差異。

12. 以下方法可以終止CCK-8反應(96孔板): (a)顯色反應后,將培養板放置于4℃冰箱內。(b)每孔加入10μL 0.1M HCl溶液。(c)每孔加入10μL 1% (w/v) SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液。注意:反應停止后,應在24小時內測定。

13. 為了您的健康安全,請規范操作,穿戴實驗服與手套開展實驗。

14. 本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及治療。



10/實驗案例分析


1. 將不同數量的HeLa細胞按照每孔100μL 培養液接種于96孔板中,培養24小時后細胞充分貼壁,每孔加入10μL CCK-8溶液。

2. 孵育1小時后測定450nm的吸光度值,檢測結果如圖3所示。(檢測結果僅供參考,實測數據會因檢測儀器等的不同而存在差異)


LeapWal Cell Counting Kit-8 CCK-8

圖3: CCK-8 試劑盒檢測細胞活性



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上海牧榮生物科技有限公司

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