jenabioscience:病毒RNA+DNA制備試劑盒-柱試劑盒Viral RNA+DNA Preparation Kit - Column Kit ——從血液、血清、組織、細(xì)胞培養(yǎng)物或拭子中基于旋轉(zhuǎn)柱的RNA+DNA純化

Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立，利用超過(guò)25年的學(xué)術(shù)知識(shí)為100多個(gè)國(guó)家的研究和行業(yè)客戶開(kāi)發(fā)創(chuàng)新試劑。

供一般實(shí)驗(yàn)室使用。

運(yùn)輸:在環(huán)境溫度下裝運(yùn)

儲(chǔ)存條件:在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存

保質(zhì)期:12個(gè)月

描述:
病毒RNA+DNA制備試劑盒設(shè)計(jì)用于從各種病原體生物(如病毒或細(xì)菌)中快速有效地分離RNA和DNA。樣品可以是新鮮的或冷凍的血漿/血液(用除肝素以外的抗凝血?jiǎng)┨幚?、血清、其他無(wú)細(xì)胞體液或病原體感染的組織。該試劑盒允許從鼻腔或咽喉拭子中高產(chǎn)量分離病毒RNA/DNA。
該試劑盒專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于使用低洗脫體積分離高質(zhì)量核酸，并允許靈敏的下游分析，包括定量PCR和RT-PCR。純化的RNA/DNA不含蛋白質(zhì)和核酸酶。病毒RNA+DNA制備試劑盒使用包含離液鹽的裂解緩沖液來(lái)滅活RNA酶/DNA酶，并使用優(yōu)良的硅膠膜技術(shù)來(lái)快速純化完整的RNA/DNA。制備程序經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可在30分鐘內(nèi)獲得可靠的結(jié)果。

內(nèi)容:

所需的附加材料:
96-99 %乙醇
1.5毫升試管

準(zhǔn)備程序:
DNA純化遵循細(xì)胞裂解、RNA/DNA結(jié)合、洗滌和洗脫程序。開(kāi)始前，按照數(shù)據(jù)表和瓶子上的指示，向清洗緩沖液A和B中添加乙醇(96-99 %，不包括在試劑盒中)。請(qǐng)注意，洗滌緩沖液的乙醇濃度在長(zhǎng)期儲(chǔ)存過(guò)程中可能會(huì)降低，導(dǎo)致最終DNA產(chǎn)量下降。
所提供的裂解緩沖液包含載體分子以增強(qiáng)RNA/DNA在柱膜上的結(jié)合。

1a從鼻腔或咽喉拭子制備

• 轉(zhuǎn)移250微升

  裂解緩沖液

  放進(jìn)微量離心管。
• 切下帶有收集的鼻或喉細(xì)胞的棉尖，并將其置于微量管中。
• 關(guān)閉試管并渦旋15秒。
• 在室溫(20-25°C)下孵育10分鐘。
• 取下棉簽，在試管邊緣將其擠出。
• 添加250微升

  乙醇(96-99 %)

  并通過(guò)輕輕渦旋充分混合。

1b從血漿、血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、無(wú)細(xì)胞液體或病毒感染組織中制備

• 將100 μl血漿、血清、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、無(wú)細(xì)胞液體或病毒感染組織轉(zhuǎn)移到1.5 ml微管中。
• 注意:較大體積(高達(dá)200 μl)的樣品可以很容易地放大，但可能需要更大的試管用于裂解程序。
• 添加250微升(或2.5倍樣品體積)的

  裂解緩沖液.

• 渦旋15秒。
• 在室溫(20-25°C)下孵育10分鐘。
• 添加250微升(或2.5倍的樣品體積)

  乙醇(96-99 %)

  并通過(guò)輕輕渦旋充分混合。

2列裝載

• 放置a

  旋轉(zhuǎn)柱

  放入提供的2 ml收集管中。
• 旋轉(zhuǎn)溶解產(chǎn)物-乙醇混合物，并將溶液轉(zhuǎn)移到

  旋轉(zhuǎn)柱.

• 蓋上蓋子，離心

  旋轉(zhuǎn)柱

  轉(zhuǎn)速為13，000轉(zhuǎn)/分鐘，持續(xù)1分鐘。
• 丟棄收集管中的流通液，并將色譜柱放回同一管中。
• 注意:色譜柱儲(chǔ)器的最大容量為800 μl。對(duì)于更大的樣品容量，丟棄中間的流通液并再次裝載旋轉(zhuǎn)色譜柱。

3柱清洗

• 添加500微升

  洗滌緩沖液A(加入乙醇)

  到

  旋轉(zhuǎn)柱

  并在13,000 rpm下離心1分鐘。
• 丟棄收集管中的流通液，并將旋轉(zhuǎn)柱放回同一管中。
• 添加500微升

  洗滌緩沖液B(添加乙醇)

  并以13，000 rpm離心1分鐘。
• 注意:在第一次使用清洗緩沖液B之前，按照瓶子上的指示添加乙醇。
• 丟棄收集管中的流通液，并將旋轉(zhuǎn)柱放回同一管中。
• 以13，000 rpm的速度離心1分鐘。
• 注意:干燥膜很重要，因?yàn)闅埩舻囊掖伎赡軙?huì)干擾下游反應(yīng)。

4洗脫

• 放置

  旋轉(zhuǎn)柱

  放入新的1.5毫升微量試管(未提供)。
• 添加40-50微升

  洗脫緩沖液

  直接到旋轉(zhuǎn)柱的膜上。
• 注意:避免用移液管頭端接觸薄膜。
• 室溫下孵育1分鐘。
• 以13，000 rpm的速度離心1分鐘。
• 使用2-5 μl洗脫的RNA和/或DNA作為PCR或RT-PCR檢測(cè)或進(jìn)一步下游應(yīng)用的模板。洗脫的RNA/DNA可以?xún)?chǔ)存在-70℃下

上海牧榮生物科技有限公司

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