HE染色。

                                                                    檢碩科學上海有限公司
染色結果觀察蘇木精—伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法，石蠟切片技術里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。

細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色，軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色，粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。著色情況與組織或細胞的種類有關，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時，伊紅著色由淺變深。

細胞核裂解、溶解、細胞腫脹、細胞膜不完整的特征。神經(jīng)元細胞周圍有空白區(qū)域，提示有水腫的存在。

小鼠飼喂了高脂肪食品，在血管周圍可見脂肪空洞。水泡樣變性和脂肪變性 炎癥細胞浸潤。

在HE染色條件下，脂類均會被染色過程中使用到的二甲苯等有機溶劑溶解而成空泡或空斑樣，一般情況下，空泡樣脂滴輪廓清晰，易于分辨。但是為了證明確實是脂類，還需用針對脂類的特殊染料及染色方法，如油紅，蘇丹黑等。

脂肪變性在石蠟切片HE染色下的有兩個特點：1.細胞核被脂滴擠向一側，2.由于脂肪被溶解，空泡很干凈，邊緣整齊。

空泡變性：核在中央，空泡內有網(wǎng)狀物質邊緣不整齊。

染色步驟

1、取材與固定：

從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0．5厘米)投入預先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固，以防止細胞死后的自溶或細菌的分解，從而保持細胞本來的形態(tài)結構。

2、脫水透明：

一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。

3、浸蠟包埋：

將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟*浸入組織塊后進行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機上切成很薄的切片。

4、切片與貼片：

將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。

5、脫蠟染色：

常用HE染色，以增加組織細胞結構各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色，被堿性染料染色的結構具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細胞質染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，最

后入蒸餾水，就可染色。HE染色過程是：

①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。 ②酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘。③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。

④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。

6、脫水透明：

染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。

7、封固：

將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用

                                                                                                                                  本篇轉至實驗之家