Gibco MEM液體培養基（C11095500BT）

產品名稱：MEM液體培養基

貨號：C11095500BT

規格：500ml

保存溫度：2-8度

蘇州千舍批發供應hyclone液體培養基，Gibco胎牛血清，無外泌體血清，Gibco液體培養基，SERANA胎牛血清

蘇州千舍生物對液體培養基常見問題總結：

1. 液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏！！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的pH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

　　2. 液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

　　3.液體培養用液pH對細胞生長的影響

　　由于，大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

　　但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

　　4.細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？

　　不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：

　　（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰蛋白酶

　　溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。

　　多數細胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。

　　Gibco MEM液體培養基（C11095500BT）購買蘇州千舍細胞注意事項：

　　一、客戶收到細胞先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；

　　收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。

　　二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀察細胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后打開蓋子，先把培養基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養16hr(時間根據細胞生長情況調整）之后，傳代或者凍存。

　　2. 超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來；

　　3) 加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

　　注意：換液時一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

　　四、細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

　　（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發；

　　（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發；

　　（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數細胞未存活，重發；

　　（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現污染，重發；

　（5）視具體情況而定。

　　五、細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

　 （1）客戶造成細胞污染，不重發；

　　（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

　　（3）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

　　（4）細胞培養時經其它處理的，不重發；

　　（5）細胞收到2天內，未告知，不重發；

　　（6）視具體情況而定。

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★Hyclone培養基:SH30021.01、SH300243.01、SH30265.01、SH30256.01 

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