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純化磁珠的工作原理及純化方法
純化磁珠是一種用于純化生物樣品的新型材料。它可以通過磁性吸附的方式快速、高效地從混雜的生物樣品中分離出目標分子,如蛋白質、DNA或RNA等。
純化磁珠的工作原理:
工作原理是基于磁性吸附技術。所謂磁性吸附,即是利用磁性微粒的磁性將目標分子吸附在磁珠表面,然后通過磁力將磁珠和吸附的分子分離出來,從而實現分離純化的目的。
制備:
主要是由磁性微粒和作用于微粒表面的官能化試劑組成。通常采用配體、抗體、親和素等官能化試劑對磁性微粒表面進行修飾,使其具有特異性識別和吸附目標分子的能力。
制備的方法有多種,最為常用的就是交聯反應法。具體方法是將磁性微粒和交聯劑混合,在水溶液中反應,生成交聯磁性微粒,并用細胞孔徑分離技術分離所得的交聯磁性微粒,最后采用官能化試劑進行修飾。
純化方法:
通常,純化磁珠的純化方法可以分為兩種:手工操作和自動化操作。手工操作的方法較為簡單,適用于小規模操作。自動化操作的方法則適用于大規模商業化生產。
手工操作的純化方法一般包括以下步驟:
1.磁珠預處理:將磁珠分散在緩沖液中,加入磁性分離架(磁珠分離器)靜置5-10分鐘,磁性分離架和磁珠之間的吸附力會使磁珠沉降到磁性分離架的底部;
2.磁珠清洗:將磁性分離架和磁珠從混合物中移開,洗滌吸附在磁珠上的目標分子;
3.磁珠復蘇:用純的緩沖液重懸沉淀下來的磁珠,從而得到目標分子從磁珠中脫離的純化產品。
在自動化操作的純化方法中,通常采用毒理性較低、穩定性較高、流動性較好的磁珠,然后使用自動化純化儀器對樣品進行處理。這種方法具有大規模純化的優點,但也需要專業人員進行操作和維護設備。