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游離DNA提取試劑盒的操作手段
近幾年來，隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展，游離DNA的應(yīng)用價(jià)值越來越大，如優(yōu)生篩查、腫瘤早期診斷、遺傳病檢測(cè)和病原體感染基因檢測(cè)等。游離DNA是存在于血液(血漿或血清)、腦脊液等體液中的細(xì)胞外DNA，也叫循環(huán)DNA。其主要是由單鏈或雙鏈DNA以及單鏈與雙鏈DNA的混合物組成，以DNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物或游離DNA兩種形式存在。分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段可對(duì)普通血液樣品進(jìn)行特異性地腫瘤類型檢測(cè)。游離DNA提取試劑盒的操作手段你知道嗎？
1. 請(qǐng)自行準(zhǔn)備：無水乙醇、1.5mL離心管。
2. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇。 b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。
3. 取1.5mL離心管，加入200μL樣本，4μLDNA Carrier混合均勻，加入300μL 裂解液及20μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴10 分鐘。
4. 加入1000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液；
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，重復(fù)步驟5。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內(nèi)，加入30-50 μL 洗脫液，靜置3 分鐘，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。