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-----尚恩生物  I8627859203------

HFL1人胚肺成纖維細胞HFL1細胞系

HFL1人胚肺成纖維細胞HFL1細胞系

培養環境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、收貨處理方式（T25瓶/凍存管）

【T25】

①快遞保存溫度：室溫

②初步平衡：T25瓶表面消毒后，放37度培養箱平衡復溫2h以上

③處理方式：吸走大部分培養基，留10-12ml培養基，拍照并觀察細胞。密度80%以上即可吸走培養基消化傳代，若密度低于80%可以留10-12 ml繼續培養至細胞密度80%以上

④接種方式：T25傳代第①次建議1:2傳代，即瓶T25傳成兩瓶

⑤注意事項：若細胞出現漂浮，T25瓶不開封，放至37度培養箱過夜，若細胞貼壁即說明活性正常，按正常操作消化傳代即可；若未貼壁，收集細胞培養基離心后，將細胞重懸接種到新的培養瓶中，同時原瓶還貼壁的細胞加培養基繼續培養
發貨T25瓶裝滿大約有75ml培養基，可以收集起來，1500rpm離心5min后，取上清4度保存，用于培養細胞，以平穩過渡到客戶自己的培養基

【凍存管】

①快遞保存溫度：液氮長期保存或-80度3天以內

②初步平衡：無須平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存

③處理方式：37度水浴搖晃盡快融化細胞，直接在凍存管內將細胞離心。離心轉速以離心力150g(約900rpm)左右，1min為宜，棄上清，沉淀用新鮮培養基重懸后接種到10cm培養皿，顯微鏡下觀察細胞并拍照，24h后換液一次

④接種方式：一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶

⑤注意事項：收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存，以上情況及時反饋
干冰發貨的細胞只能在-80保存3天左右，長時間保存會出現活性下降。干冰發貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶同時復蘇兩支均狀態不佳，我方將不提供免費售后服務

特殊情況：

1.若培養瓶或者凍存管出現破碎或漏液情況，及時拍照聯系銷售反饋，按指導進行進一步處理。若只是外包裝破損一般不影響培養瓶和凍存管，請放心使用。

2.若無法觀察到細胞，建議收集細胞培養基，1200rpm離心5min，觀察細胞沉淀量，并用少量培養基重懸沉淀后，取部分懸液放到計數板或者載玻片上觀察細胞。

3.部分細胞增殖較快，發貨細胞量較多時，培養基可能出現顏色變黃現象。繼續培養使用此類培養基時，需要及時觀察培養基顏色變化，縮短培養基換液周期，并每瓶多加2-3ml培養基。

4.收貨當天不處理細胞時，T25瓶可以消毒拆封口膜后不擰開瓶蓋放37度培養箱靜置過夜，但不建議超過24h；凍存管可以直接放液氮長期保存或-80度3天以內，必須一周內復蘇一只培養檢查，否則將超過一周售后期。

培養操作說明：

1.細胞培養需要充足經驗，新手或者沒有類似細胞培養經驗的人建議在專業人士指導下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養密度。

2. 部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養常見現象，不影響細胞增殖和實驗。

3. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種，消化完成后加*培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰m溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰m品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準，此時結束消化最佳，避免消化過度導致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產生過多氣泡，否則會嚴重影響細胞狀態。

5. 不同細胞生長速度差異較大，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6. 細胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回10%血清。