BJ5183-AD-1 感受態細胞
產品信息：
組成 BC114-01
BJ5183-AD-1 Competent cells 20×100μl
pAdTrack-CMV（10ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產品說明：
BJ5183-AD-1菌株攜帶的pAdEasy-1質粒包含了大部分人腺病毒5型的基因組序列（E1/E3基因缺失），表達
可供pAdEasy-1骨架質粒和pAdEasy穿梭質粒進行同源重組的所有組分，產生重組腺病毒質粒。pAdEasy-1為
33.5kb，具有氨芐抗性，一旦與穿梭載體重組，其抗性消失。抗性的pAdTrack-CMV質粒檢測感
受態細胞的轉化效率大于103 cfu/μg。
基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR ) [pAdEasy-1 (AmpR )]
菌株抗性：對敏感，有和氨芐抗性
質粒轉化步驟：
1. 將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入目的質粒（含有目的基因并線性化）到細
胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5. 加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養 60 分鐘；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養 12-16 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl
吸頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平
板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14.