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免疫細胞(ICC)實驗步驟有哪些?

閱讀:1198      發布時間:2023-10-19
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免疫細胞化學 (ICC) 是一種使用熒光抗體或染料來檢測細胞內靶抗原的技術。那么你知道免疫細胞(ICC)實驗步驟有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!

一、細胞培養/固定

很多抗原在離體組織中只存在很短時間,自溶(autolysis)和壞死(necrosis)使得抗原進一步降解,組織形態和結構被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中,固定液完quan滲透組織,使蛋白失去活性,并且使組織被保存、穩定在接近 in vivo 狀態。

二、通透處理

通透即為對細胞膜進行打孔處理,使抗體能進入到細胞中和抗原發生結合。通常,當抗體檢測細胞內蛋白時(包括抗原表位在胞內段的跨膜蛋白),需要對細胞進行通透,一般將細胞樣品在含 0.1-0.25% Triton X-100PBS中孵育5-10分鐘。

三、封閉

對樣本進行封閉,同樣是為了阻斷抗體抗原之間的非特異結合,降低背景和潛在假陽性染色。

四、一抗孵育

ICC 實驗的成功也依賴于靶標抗原特異性結合的一抗。

五、二抗孵育

對于間接檢測,二抗是成功顯示一抗分布的關鍵。使用二抗和相關檢測系統能夠擴增信號,因為不止一個二抗分子與單個一抗結合。

化學顯色與熒光檢測:您可以選擇化學顯色法,使用酶標記的二抗,也可以選擇熒光法(免疫熒光),使用熒光染料標記的二抗進行檢測。

六、封片觀察

顯色完成后,通常會對細胞進行復染,復染劑對特定的細胞結構進行染色,增加染色對比效果,明確細胞或亞細胞定位。

復染試劑的選擇取決于您對樣品的染色方式:顯色劑(一種在標準光學顯微鏡下可見的染料)或熒光染色。

更多有關免疫細胞(ICC)實驗的步驟,請聯系天津益元利康生物科技有限公司:


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