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細胞消化的方法有哪些？

我們的細胞在培養(yǎng)時大部分會以貼壁的形式生長，它們在機體內(nèi)時，也是與其他細胞或者細胞外基質(zhì)結(jié)合的。細胞培養(yǎng)過程中使用的wan全培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽性電荷的促細胞附著因子(層黏連蛋白 Laminine、纖維連接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)），能幫助細胞附著于帶陰性電荷的底物上，并形成連接、貼壁伸展。使細胞解除這種附著，就是細胞消化。那么你知道細胞消化的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、機械消化法

直接用培養(yǎng)基吹打或使用細胞刮刀，通過外力使細胞解除貼壁狀態(tài)，一般用于不需要繼續(xù)培養(yǎng)的細胞，相較于其他方法，機械消化法無法量化控制，細胞分散效果差，且會造成大量細胞破損，影響細胞傳代狀態(tài)。

二、離子螯合法

細胞膜表面蛋白大多需要鈣、酶離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種粘附蛋白（如：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等），螯合劑會在不破壞細胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使粘附蛋白失活而減少細胞-細胞間及細胞-底物間的連接作用，使細胞容易與培養(yǎng)底物分離。

0.02% EDTA是常用的離子螯合劑，在37℃效果最jia（消化敏感的細胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細胞或細胞表面標(biāo)記實驗細胞。

但EDTA無法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續(xù)細胞貼壁效果。

三、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強的細胞。上述實驗方法中最常見的還是胰酶消化。大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可，但是我們發(fā)現(xiàn)吸去胰蛋白酶后，殘留的那些附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2分鐘足夠消化細胞（絕大部分1分鐘不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續(xù)這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是先采用PBS潤洗細胞吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化細胞。

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