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ELISA實驗常見問題及解決方法

閱讀:853      發(fā)布時間:2024-4-7
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  酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術(shù),由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年描述。該測定依賴于抗原-抗體相互作用的原理,并利用酶和比色檢測來量化目標分子,主要用于檢測和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測定通常應(yīng)用于各個領(lǐng)域,包括臨床診斷、藥物研究和生命科學基礎(chǔ)研究。那么你知道ELISA實驗常見問題及解決方法嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  一、高背景
 
  原因:洗板不充分、Streptavidin-HRP 加樣量過高、孵育時間是否過長、樣本的交叉污染
 
  解決方法:檢查洗板是否按要求進行;洗板不充分;濃縮洗滌液有結(jié)晶就使用,導致洗滌不充分;檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制;檢查孵育時間是否按要求進行;注意實驗過程中可能造成樣本交叉孔間反應(yīng)的操作。
 
  二、無信號值
 
  原因:試劑使用順序錯誤、試劑配制錯誤、試劑配制濃度錯誤
 
  解決方法:檢查試劑使用順序是否存在問題,重復測試;檢查是否存在試劑配制錯誤;檢查試劑是否因標準蛋白、抗體或SA-HRP濃度配制過低造成信號值無。
 
  三、過強的信號值
 
  原因:洗板不充分、TMB底物變質(zhì)、Streptavidin-HRP 加樣量過高
 
  解決方法:
 
  洗板不充分,造成SA-HRP殘留。檢查洗板是否按要求進行;如使用洗板機,請充分沖洗管路并確保每個孔都被全部沖洗;TMB底物是否存在變藍,使用新的底物試劑;避免使用金屬物質(zhì)接觸底物造成變質(zhì)失效;檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制;檢查加樣量是否按要求進行。
 
  更多有關(guān)ELISA實驗常見問題及解決方法,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司!

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