細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下,使其生長繁殖,并維持其結構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞,也可以是細胞系。細胞復蘇是細胞培養的重要環節,下面讓我們一起來看看細胞實驗的常見問題都有哪些吧!
1.如何選用細胞系培養基?
優先根據細胞來源公司提供的培養條件,其次參考ATCC推薦細胞對應培養基。一般建議不要隨意更換培養基種類。細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用與原先提供的培養條件不同的培養基,可能造成細胞形態發生變化或無法存活,以及細胞的表型功能丟失。
2.為何培養基用一段時間后,顏色偏紫?
培養基隨著多次開蓋會使培養液CO2 逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性從而變紫,尤其是剩余的培養基越少越容易變紫??蓪⑴囵B瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養箱校正溶液PH值,過一段時間就會變回正常。變紫的培養基是可以繼續使用的,培養細胞時在培養箱會自動恢復顏色。
3.細胞培養液變黃變渾,如何處理?
細胞培養液變黃多半是細胞密度過大,細胞增殖速度過快,產生大量酸性代謝廢物,導致細胞營養不足。而培養液變渾多半是發生了細菌污染。出現這種情況應立即進行消化傳代處理。
4.血清中出現的沉淀是什么,有影響嗎?
①纖維蛋白,是經常出現的較大沉淀物,可達到1-2mm,用肉眼可觀察到;
?、谀懝檀?、脂肪酸酯以及一些蛋白質,是血清出現沉淀物的常見原因;
③磷酸鈣,也是一種常見沉淀物,通常會使血清出現渾濁,并且在37℃培養時會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物污染。
5.細胞何時換液最佳?
?、偌毎瘋鞔螅ㄗh隔天或隔兩天換一次液;
?、诩毎麄鞔?,發現碎片多、死細胞多,在細胞形態已經形成的前提下可第二天換液;
③對于生長速度較慢的細胞,可多放點培養基,減少換液次數,讓細胞靜養;
④細胞傳代后,細胞分布不均、細胞堆疊、細胞間隙大、局部密度大,這些情況下不用換液,可采取消化重鋪的方式。
7.細胞支原體污染如何處理?
支原體污染是比較難去除的,特別容易復發,一般建議直接更換新的細胞,如特別精貴或重要的細胞可嘗試使用四環素、大環內酯類抗生素(泰樂霉素)、喹諾酮類抗生素。
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