一、制備細胞生長培養基
所使用的培養基將取決于所使用的細胞類型。例如:
使用無菌技術在II級安全帽下工作。
二、在顯微鏡下檢查細胞
在生長過程中，應該每天檢查細胞，以確保它們健康并按預期生長。它們應該主要附著在燒瓶的底部，形狀圓而豐滿或細長，并在其膜周圍折射光線。這表明他們是健康的。
介質應該是粉橙色。如果細胞大量分離和/或看起來干癟和顆粒狀/顏色深，則丟棄細胞，不要用于檢測。
三、制備細胞懸浮液
1. 所有細胞處理和培養基制備應在II類安全柜中使用無菌技術進行。
2. 當細胞融合70-80%時，它們仍應處于生長的對數階段，可用于電鍍。
3. 首先將培養基在37°C水浴中加熱至少30分鐘。
4. 準備好后，小心地從一個175平方厘米的培養皿中倒入所需細胞的培養基（含有實驗室消毒劑），注意不要增加任何滴入的污染風險。
5. 立即更換，小心地倒入100毫升預熱好的新鮮培養基。
6. 使用細胞刮板，輕輕刮掉燒瓶底部的細胞到培養基中。有些細胞系可能需要胰蛋白酶化。在繼續之前，檢查燒瓶底部，檢查所有的細胞是否脫落。
7. 確保待計數的細胞懸浮液通過輕搖瓶混合均勻。必要時可使用血清學移液管。
8. 在細胞wan全有機會沉淀之前，使用血清學移液管取出約1ml細胞懸液，并將其放置在附注管中。
9. 用血細胞計進行細胞計數。
四、獲得正確的細胞密度
使用下面的計算得到正確的細胞密度。這應該是4.5 × 105個細胞/mL左右，但需要根據細胞系進行優化。
N = df
45 × 104
N是每毫升細胞數
DF是計算出來的稀釋系數
由于細胞在100ml培養基中，接下來的計算是：
100 mL x稀釋因子
這將給出細胞應該在的介質體積的值。
用血清學移液管加入適量的預熱培養基。
例子:
如果細胞計數為55 × 104/mL，有100 mL細胞懸液：
55 × 104細胞/mL = 1.22
45 × 104細胞/mL
100毫升× 1.22 = 122毫升
因此，對于45 × 104/mL的細胞懸浮液，在100 mL細胞懸浮液中加入22 mL預熱培養基。
如果正確細胞密度所需的體積小于100ml：
將細胞倒入50ml離心管中。
在離心機中以100轉/分旋轉10分鐘，確保離心機平衡。
小心地倒出上清。
將細胞顆粒重懸于所需體積的預熱培養基中。
Abcam抗體代理——天津益元利康生物科技有限公司，提供abcam產品，如抗體、試劑盒、多肽等，更多abcam品牌產品，歡迎咨詢！
Abcam 致力于鑒別、開發和提供高質量的生物試劑和工具，這些試劑和工具在藥物發現、診斷和基礎研究等多個領域和應用中起著至關重要的作用。
Abcam產品主要范圍：一抗、二抗、ELISA 和配對抗體對、基因敲除細胞系和裂解液、多重檢測激動劑、拮抗劑、活化劑和抑制劑、蛋白等。
Abcam抗體特色產品列表：
產品名稱 | 產品簡介 |
RabMAb®，兔單克隆抗體 | Abcam致力于為您提供最you質的抗體。Abcam的 RabMAb® 兔單抗 結合了單抗的特異性，為兔免疫系統提供了出色的抗原識別能力。 Abcam的大多數兔單抗采用 重組技術生產，批間一致性高、證實的特異性，可保證長期供應。 為了提高靈活性，Abcam采用新的配方，配置了 10,000 多種無載體蛋白，或不含 BSA 和疊氮化物的抗體 和 抗體對，這些抗體和抗體對可以隨時偶聯，非常適合用于簡單的抗體標記或夾心法檢測開發。 |
Alexa Fluor® 偶聯一抗 | 蛋白質很少孤立地發揮作用。相反，它們通常在多亞基化合物中發揮作用。因此，要想了解蛋白質的功能，準確掌握治療進展，必須在多組分狀態下靶向蛋白質。 如果沒有合適的工具，蛋白質分析將會極其困難，并且得出錯誤的結果。如果同時使用一抗和二抗（間接檢測），會出現物種間交叉反應；尋找適當標記的偶聯一抗也可能存在挑戰（直接檢測）。為了克服這些問題，Abcam獨jia推出了一系列帶有多種不同熒光標記的偶聯抗體產品。 |
4
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務