標題:化學轉(zhuǎn)染分類及介紹
一、轉(zhuǎn)染
轉(zhuǎn)染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。
二、化學轉(zhuǎn)染
1.陽離子脂質(zhì)體
【原理】帶正電荷的脂質(zhì)體(由磷脂、膽固醇等組成的具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu))依靠靜電作用與DNA形成DNA-脂質(zhì)體復合物,通過細胞的內(nèi)吞作用進入細胞.
【優(yōu)點】操作簡便
適合轉(zhuǎn)染各種細胞
對DNA濃度有一定要求
重復性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清
【缺點】需進行條件優(yōu)化(一些細胞對陽離子脂質(zhì)體較敏感)
有些細胞系不容易轉(zhuǎn)染
血清的存在干擾復合物的形成,導致低轉(zhuǎn)染效率
2.陽離子聚合物(如聚乙烯亞胺(PEI))
【原理】帶正電的聚合物與DNA形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進入細胞
【優(yōu)點】不含疏水部分而wan-quan溶于水
可進行化學修飾
不像脂質(zhì)體一樣破壞細胞結(jié)構(gòu)
濃縮DNA,將DNA運送到細胞內(nèi),并其在細胞核內(nèi)釋放
細胞毒性很低,高效
不被血清清除
【缺點】不能生物降解(樹枝狀大分子)
只限于瞬時轉(zhuǎn)染
3.磷酸鈣法
【原理】磷酸鈣能夠促進外源DNA和細胞的結(jié)合,磷酸鈣-DNA復合物能夠附著到細胞表面,并通過內(nèi)吞作用進入細胞
【優(yōu)點】操作簡單
對DNA濃度要求高
【缺點】對pH值敏感,需仔細制備試劑
適用性有局限(不適用于原代細胞和懸浮細胞)
不能采用RPMI培養(yǎng)基(含有高濃度的磷酸鹽)
三、Polyplus轉(zhuǎn)染試劑
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