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產品貨號:KX0210049

產品名稱:新型乳劑(佐劑)

類別:免疫佐劑

注意事項:運輸保存：建議常溫運輸，2-8oC保存，無菌取用，有效期18 個月。（切勿凍存?。?/p>

產品描述:新型乳劑(佐劑)是一種具有自主知識產權、配方的新型油包水佐劑，用于免疫小鼠和家兔等實驗動物以制備單、多克隆抗體。該佐劑以弗氏不佐劑為基礎，添加了多種具有強免疫刺激活性的 TLR 配體。該佐劑與常規使用的弗氏佐劑相比，具有（1）佐劑活性強于弗氏不佐劑；（2）與弗氏佐劑不同，不含有干擾免疫應答的無關蛋白成分；（3）安全性好，副反應率低；（4）免疫針次少、抗原用量低等多方面優點。

使用方法:

用生理鹽水將抗原稀釋到2倍最終濃度（按小鼠每針次50μl、家兔每針次100μl用量配制）。備注：推薦使用的抗原用量為小鼠每針次10-20μg、家兔每針次20-50μg。

乳化：無菌條件下取出所需用量（按小鼠每針次 50μl、家兔每針次100μl）與抗原按體積比1:1混合乳化，至形成白色油包水的乳濁液狀態（鑒定方法：滴一滴乳濁液在常溫水面上，若凝聚不散開或散開緩慢，成滴狀浮于水面，即乳化，為合格的油包水劑）。乳化方式有以下幾種：

(1)機械Vortex法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中，使用槍頭反復吹打混合后，放在旋渦混勻儀上劇烈振蕩乳化5-30min以上, 直至形成粘稠的乳劑為止。備注：乳化過程中儀器會放熱，因此可以將整個操作系統放置于4℃條件下進行。

(2)手動注射器混合法：

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中，槍頭反復吹打混合，隨后轉移至一個注射器內，安裝針頭，針管有助于乳液的形成，用力上下抽吸，乳化30-60min以上，直到形成穩定的乳液。備注：此操作過程中注意防脫針及個人安全。

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中，槍頭反復吹打混合，隨后轉移至一個注射器內，利用三通閥等將其與另一個注射器連接，注意排凈空氣，將抗原和佐劑在兩個注射器中交替推動，乳化30-60min以上，直至形成粘稠的乳劑并很難推動為止。備注：此操作過程中注意漏液。

(3)機械攪拌法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中，將佐劑乳化器（貨號: BDYQ1001）攪拌頭置于混合液的中上部打開開關，然后用自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層，慢慢下移，隨后根據乳化的程度，可局部上下擺動前進，最終達到溶液底部完成乳化。博奧龍佐劑乳化器能夠輕松解決佐劑與抗原的乳化過程，一般1-10ml乳化量3-5min即可，最多不超過10min。

(4)研磨法：取適量佐劑放入無菌的研缽，緩慢滴加等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。注意：本方法適用于大量制備，缺點是研缽壁上易粘附大量乳劑，抗原損失較大。

(5)超聲法：使用配有小探頭的超聲波設備將抗原和佐劑的混合物進行超聲處理。超聲波的能量有助于打破抗原和佐劑的界面，使其均勻乳化。這種方法適用于一些難以乳化的樣品，但是要控制超聲頻率、時間和溫度，超聲容易激發一些自由基，對抗原有未知損害。

通過皮下或肌肉單點注射免疫動物，小鼠每針次100μl，家兔每針次200μl。備注：（1）佐劑與抗原混合后應盡快注射，若放置時間較長出現水油相分層，則必須按上述步驟 2重新混勻；（2）抽入針管前應搖勻，抽入針管后應盡快注射；（3）盡量選擇引流淋巴結附近（如腋窩和腹股溝附近）的皮下 或肌肉進行免疫。

第21天按同樣方式加強免疫1針。備注：每次佐劑和抗原現配現用。

第35天采微量血進行ELISA測定，抗體滴度應在1:10000-1:10000000 范圍內，隨后即可采全血或按常規方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合。

若抗體滴度沒有達到要求，可在第42天按同樣方式加強免疫1針。備注：通常情況下小鼠只需免疫2針，而家兔往往需要免疫3針。

若免疫3針，可在第52-56天采微量血進行ELISA測定，抗體滴度應在1:10000-1:1000000范圍內，隨后即可采全血或按常規方法進行抗原沖擊免疫和脾細胞融合。備注：佐劑免疫效果有時也與抗原特性有關， 若免疫3針后仍達不到要求，不建議進行更多針次免疫。