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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CC96304 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
產品貨號：CC96304
產品規格：10 ×100ul/100×100ul
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
GV3101感受態
產品簡介
GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因Rif，為了便于轉化操作，
此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有 vir 基因
(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的 T-DNA 轉移
功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質粒含
有篩選標簽：Gent，賦予 GV3101 菌株慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的
轉基因操作，本公司生產的 GV3101 化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301 質粒檢
測轉化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
GV3101
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μl 感受態細胞中，用手撥da管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮
5 分鐘（或干冰乙醇浴和-80 ℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養基，于 28 ℃振蕩培養 2~3 小時；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB
平板上，倒置放于 28℃培養箱培養 2-3 天（當平板只含有 50 μg/ml Kan 時，28 ℃培養 48 h 即可；平
板中同時加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時，需 28℃培養 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需
要 28℃培養 72-90 h）。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應高于 25 μg/μl，利福平濃度過高不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。
GV3101感受態
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