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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100mg/1g |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CS1152 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
產品貨號：CS1152
產品規格：100mg/1g
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
D-Luciferin, potassium salt D-熒光素鉀鹽
英文名稱：D-Luciferin, potassium salt
CAS：115144-35-9
分子式：C11H7N2KO3S2
分子量：318.41
外觀：黃色粉末。
純度：≥ 99% (HPLC)
Ex (nm) ：328
Em (nm)：533
溶劑：Water
保存條件：-20℃干燥避光保存，有效期二年。
D-蟲熒光素(D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應，接著它被氧化形成二氧雜環丁烷結構并發出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發光用于ATP監控以測定細胞活力以及細菌計數。它還用于報告基因檢測。可與小動物活體成像系統配套使用，用于標記LUC基因后的體內活體熒光檢測。
1、D-熒光素適合做哪些實驗?
D-熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素，作為Luciferase的作用底物，常用于以下實驗：
1. 報告基因分析
2. In vivo imaging (動物活體成像)
3. In vitro imaging (細胞體外分析)
4. ATP測定
5. 其它luciferase及其基因相關的分析和研究工作
2、D-熒光素應用于活體成像的基本原理
細胞中D-熒光素酶參與的化學發光反應遵守酶促反應的基本原理，在底物D-熒光素鉀過量的情況下，反應產生的光子數（發光量）與細胞中的D-熒光素酶的量成正相關，從而可以推算出細胞的數量。
3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩定性
D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液，溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。
溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5（發生水解作用）或>7.5（發生消旋化作用，D型轉化為L型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。
D-熒光素配成溶液后，在的保存條件（-80°C，pH，無氧氣）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-熒光素應盡量在1年內使用完。
有水存在的情況下，主要發生消旋化作用，即D-熒光素轉化成L-熒光素，有報道稱L-熒光素對熒光素酶催化的酶促反應有抑制作用。
4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區別
主要區別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學試驗中常用D-熒光素鉀鹽。
5、D-熒光素鉀鹽的保存和運輸條件
保存條件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打開包裝的條件下，可保存兩年時間）。
運輸條件：高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時間內常溫條件下保存，運輸條件為常溫。
原裝（沒有打開包裝）熒光素的包裝瓶中充有氬氣，保證其穩定性，打開包裝后，請嚴格按照保存條件保存。
D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性，其暴露于空氣中，易吸潮。在稱量過程中，請考慮其易吸潮的特性，先進行溫度平衡，再快速稱取
1. 注意事項
a) D-熒光素有三種形式，分別為游離態, 鉀鹽、和鈉鹽 ，鈉鹽和鉀鹽形式的 D-熒光素易溶于水性緩沖液 (pH 6.1-6.5)，儲備液可用無ATP的水配制，-20℃避光保存。游離態須用 DMSO 或者適當的堿中和才能溶解。在較高的 pH 值下，熒光素會在堿催化下形成脫氫熒光素，并外消旋化為 L-異構體。
b) D-熒光素可用于任何現有的報告分析或 ATP 分析系統。
c) 如果測試 ATP，請戴上手套并使用不含 ATP 的容器，以盡量減少所有可能的 ATP 污染源。僅使用無菌的無 ATP 水和試劑。使用高壓滅菌水制備所有試劑。
2. 實驗方案
本方案僅提供一個指導，應根據您的具體需要進行修改。
2.1 體外生物發光圖像分析的示例方案
a) 在 DMSO 中制備熒光素原液。拌勻。立即使用，或一次性分裝，-20℃ 保存，避免反復凍融，避免光照。
b) 制備0.5-1 mM D-Luciferin工作液，預熱組織培養基。
c) 從培養的細胞中吸出培養基。
d) 向細胞中加入熒光素工作液，并在成像前于 37℃ 孵育細胞 5-10 分鐘。
2.2 體內實驗
由于體內實驗劑量較大，一般為 150 mg/kg，建議選擇鉀鹽或者鈉鹽產品。
2.3 熒光素報告基因檢測的示例方案
a) 在 DMSO 中制備熒光素原液。立即使用，或一次性分裝，-20℃ 保存，避免反復凍融，避免光照。
b) 配制 1 mM D-Luciferin 工作液和 3 mM ATP，1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 溶于 25 mM tricine 緩沖液 pH 7.8。
c) 將 5-10 μL 細胞裂解物移至微孔板中。使用裂解試劑或不含裂解物的緩沖液作為空白。
d) 根據制造商的說明用熒光素工作溶液灌注發光計。
e) 立即注入 200 μL 熒光素工作溶液，積分時間為 10 秒.
D-Luciferin, potassium salt D-熒光素鉀鹽
