聯系電話
上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年
具體成交價以合同協議為準
產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BH0232 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
產品貨號：BH0232
產品規格：1×10^6
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
sh-sy5y轉染突變型人神經母細胞瘤細胞(STR鑒定）
細胞介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉移灶的神經母細胞瘤SK-N-SH細胞系經三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X106細胞/cm2。
將載有HSPB1為野生型（人源），含618個堿基的pRK7質粒，且HSPB1的N-端連有FLag標簽，做為基因模板，來構建慢病毒過表達載體，再包裝成慢病毒，將轉染好的病毒對SH-SY5Y細胞進行轉染，最終篩選出能穩定表達外源基因的細胞系。
細胞特性
1） 來源：腦神經母細胞瘤，轉移部位骨髓
2） 形態：上皮細胞樣，半貼壁（貼壁和懸浮同時存在）生長
3） 含量：>1x106細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用專用培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。
4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的專用培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備MEM 基礎培養基 43%
Ham's F-12 基礎培養基 43%
優質胎牛血清 10%
MEM NEAA非必需氨基酸 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%
P/S青霉素-鏈霉素 1%
備注：該細胞為貼壁和懸浮同時存在，換液和傳代時需要分別回收貼壁和懸浮細胞，否則細胞會越來越少。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，專用培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。
該細胞輕微貼壁和懸浮培養的細胞，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。
sh-sy5y轉染突變型人神經母細胞瘤細胞(STR鑒定）
