諾博萊德  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

CCK-8試劑盒   細胞功能檢測-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：CA9098

產(chǎn)品名稱：CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

英文名稱：CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T

產(chǎn)品簡介：

別名：CCK-8 WST-8

儲存條件：4℃密封避光

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderCA9098  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  是一種基于 WST-8的快速、高靈敏度細胞活性檢測的試劑盒，廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性甲臜化合物。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同種類型細胞，顏色深淺與細胞數(shù)量在一定限度內(nèi)呈線性關系。

本試劑盒為即用型溶液，無需再行配制，可直接用于96孔板細胞實驗，省略了細胞洗滌與收集等步驟。該試劑盒可用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。

操作步驟：（僅供參考）

一、制作標準曲線

1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2.按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3.接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加CCK-8溶液培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。

4.根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。）

二、細胞活性檢測

1.在96孔板中接種細胞懸液（100µL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（在37℃，5%CO2的條件下）。

2.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段時間（例如：6、12、24或48小時）。

 3.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段時間（例如：6、12、24或48小時）。向每孔加入10µLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8溶液之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。

 4.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時，用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

 5.如果暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入10µL0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

活力計算：

細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0 加藥)－A(空白)]×100

A（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

注意事項：

1.本試劑顏色應為粉紅色，如果發(fā)現(xiàn)溶液變黃應棄用。

 2.由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液。

 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。

 4.建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間，白細胞可能培養(yǎng)時間較長。

 5.當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔 (100µL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500 個/孔 (100µL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

 6.如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度最高。

 7.培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

CCK-8試劑盒   細胞功能檢測-常備現(xiàn)貨

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CA9098  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T