FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit

細菌總 RNA 快速提取試劑盒（免lv仿）

細菌總RNA提取試劑盒

目錄號：91018

產品內容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

溶菌mei，常溫運輸， 4℃保存；其他組分，室溫（15 ~ 25℃）保存。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是專用于提取細菌（G+、G-）的總 RNA，全新的裂解液沒有任何味道，提取過程也不需要使用lv仿，提取的產量和純度媲美進口一線pin牌。得到的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、全轉錄組測序、芯片等。

產品特點

1. 無毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 10 min！

注意事項

1. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

2. 樣品加入裂解液 BRL Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上。

3. 提取過程應使用不含 RNase 的吸頭和器皿。

重要提示：

① 第一次使用前，請先在漂洗液 RW 中加入無水乙chun，詳見瓶身的標簽。

② 每次操作前，請先配制添加了溶菌mei或者 Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，終濃度為 1mg/ml。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行。

操作步驟：

1. 離心收集 1~2 ml 菌液(108~109細胞)到一個 1.5 ml 離心管, 盡可能che底吸棄上清。

2. 根據細胞的種類和數量，充分重懸細胞在 100 μl ( 5x108細胞 ) / 200 μl

( 5x108~7.5x108細胞 ) TE 中（確保已添加溶菌mei或者 Lysostaphin 至TE 中，濃度為 1mg/ml )，或者直接用 TE 重懸后，用干凈槍頭挑取少許溶菌mei加入。

3. 室溫(15~25℃)溫育5min/溶菌mei, 或者37℃溫育15min / Lysostaphin，破解細胞壁。每 2 min 渦旋振蕩 10 sec，幫助破壁。

注意：各種細菌破壁的難易程度不一樣，一般革蘭氏陰性菌 E.coli 使用上面的條件就足夠了，甚至可能省略該步驟，但是某些革蘭氏陽性菌如B. subtilis 難破壁需要提高溶菌mei濃度到 15mg/ml 和溫育時間到10min。如果金黃色葡萄球jun需要加入 lysostaphin 到 1mg/ml，37℃溫育 15min。總之不同細菌類型破壁難易程度不同，有的難破壁的種類

需要根據用戶自己的具體情況調節mei的種類、工作濃度和溫育溫度、時間，此外還可以聯合使用玻璃珠擊打，機械破壁，蛋白mei K 消化等方法幫助破壁。

4. 加入350μl裂解液 BRL（ 如果上面使用 100 μl TE/mei ）或者700μl裂解液 BRL（如果上面使用 200 μl TE/mei），吹打混勻后，用手劇烈振蕩20 秒，充分裂解。

5. 加入 250 μl 無水乙chun（曾加入 100 μl TE / 350 μl BRL 管）或者 500 μl無水乙chun（曾加入200μl TE / 700μl BRL 管），立即吹打混勻。

6. 每次轉移≤750 μl 濾液混合液至 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附在膜上，重復此過程，直到溶液全部上柱。

7. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去乙chun。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

12. 得到的 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

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