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產品簡介：

豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）引起的一種以急性胸膜肺炎為特征的豬的呼吸道傳染病。病理特征是纖維性胸膜肺炎和出血壞死性肺炎。該病多以最急性型發(fā)生，并很快引起豬的死亡，慢性型的導致生長緩慢，成為僵豬，降低飼料報酬，造成很大經濟損失。熒光PCR技術法因其簡便、快捷、靈敏度高、特異性強成為APP檢測的主要手段之一。

本試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的傳染性胸膜肺炎放線桿菌，用于傳染性胸膜肺炎放線桿菌感染的輔助診斷。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產品經過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的傳染性胸膜肺炎放線桿菌核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于氣管分泌物拭子、肺組織等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優(yōu)化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產品線

除了傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產品參數：

產品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

標本采集

病死或撲殺豬，無菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品；生豬滅菌棉拭子沾取氣管分泌物，放入無菌試管中。

保存和運輸

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術-剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中

1.2DNA提取

1)DNA的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產的DNA-提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿7份，多配制1份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑APP反應液酶液

用量（樣本數為N）20μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到PCR反應管中，21uL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3推薦循環(huán)參數設置：

步驟循環(huán)數溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置Baseline和Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內調節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內調節(jié))，以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道35<Ct值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為35<Ct值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

6.質控標準

陰性質控品：Ct值>38或無Ct值；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct值≤32；

以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

7.1樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

7.3陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

7.4病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

7.6試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.7本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)PCR檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！